加味涤痰汤对慢性间歇低氧大鼠心肌铁死亡的影响

摘要

目的 基于磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路探讨加味涤痰汤对慢性间歇低氧大鼠心肌铁死亡的影响及其机制。方法 将30只8周龄雄性SD大鼠以随机数字表法分为正常对照组、低氧干预组、加味涤痰汤干预组，每组10只。低氧干预组和加味涤痰汤干预组采用间歇低氧箱造模，每天干预8 h。每日干预前后予以灌胃，加味涤痰汤干预组药物剂量为16.38 g/kg,其余组予生理盐水，持续12周。HE染色观察心肌组织形态学；透射电镜观察心肌细胞线粒体超微结构；生化法检测心肌组织Fe²⁺、丙二醛（MDA）含量；蛋白质印迹法检测心肌组织磷酸化PI3K（p-PI3K）、PI3K、磷酸化Akt（p-Akt）、Akt、核因子E2相关因子2（Nrf2）、谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）、溶质载体家族7成员11（SLC7A11）、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4（ACSL4）蛋白表达。DMEM高糖培养基培养大鼠心肌细胞（H9c2）;超高效液相色谱检测加味涤痰汤药物成分；CCK-8检测不同质量浓度加味涤痰汤干预下的细胞存活率。将细胞分为常氧组、铁死亡诱导剂组、铁死亡诱导剂+加味涤痰汤干预组，采用蛋白质印迹法检测p-Akt、GPX4蛋白表达；常氧组、低氧干预12 h组、低氧干预12 h+740Y-P组检测p-PI3K、GPX4蛋白表达；常氧组、低氧干预6 h组、低氧干预12 h组、低氧干预12 h+加味涤痰汤低、中、高剂量组（药物质量浓度分别为5、10和20 g/L）,检测p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、GPX4蛋白表达。结果 与正常对照组比较，低氧干预组大鼠心肌细胞排列紊乱、肿胀，线粒体排列混乱、膜密度增高、嵴断裂，同时伴有空泡变性；与低氧干预组比较，加味涤痰汤干预组心肌细胞排列较为整齐，未见明显肿胀，线粒体形态较为规则。与正常对照组比较，低氧干预组MDA、Fe²⁺含量升高，p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt值降低，SLC7A11、GPX4、Nrf2表达减少，ACSL4表达升高（P<0.05）;与低氧干预组比较，加味涤痰汤干预组MDA、Fe²⁺含量降低，p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt值升高，SLC7A11、GPX4、Nrf2表达升高，ACSL4表达降低（P<0.05）。超高效液相色谱检测加味涤痰汤含有DL-水苏碱、D-（+）-苹果酸、腺苷等。与加味涤痰汤0、1.25、2.50、5.00和20.00 g/L组比较，10.00 g/L组的细胞存活率增高（P<0.05）。与常氧组比较，铁死亡诱导剂组的p-Akt、GPX4表达降低（P<0.05）;与铁死亡诱导剂组比较，铁死亡诱导剂+加味涤痰汤干预组p-Akt、GPX4表达升高（P<0.05）;与常氧组比较，低氧干预12 h组的p-PI3K、GPX4表达减少（P<0.05）;与低氧干预12 h组比较，低氧干预12 h+740Y-P组p-PI3K、GPX4表达升高（P<0.05）;与常氧组比较，低氧干预6 h组、低氧干预12 h组的GPX4表达减少，p-Akt/Akt、p-PI3K/PI3K值均降低（P<0.05）;与低氧干预6 h组、低氧干预12 h组比较，低氧干预12 h+加味涤痰汤低、中、高剂量组的p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt值升高，GPX4表达升高（P<0.05）。结论 加味涤痰汤可能通过调节PI3K/Akt信号通路改善大鼠心肌铁死亡，从而对慢性间歇低氧大鼠心脏损伤起到一定的保护作用。

关键词

加味涤痰汤 / 磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B / 慢性间歇低氧 / 心肌 / 铁死亡 / 大鼠

基金资助

国家自然科学基金项目(No.82074192)