基于NMDAR1/cGMP通路探究“三法三穴”对轻度慢性压迫性神经损伤大鼠脊髓背角的镇痛启动机制

摘要

目的 探究“三法三穴”推拿手法对轻度慢性压迫性神经损伤(minor CCI)模型大鼠的镇痛启动机制。方法 35只SD大鼠按照随机数字表法分为5组，即正常组、假手术组、模型组、推拿组、推拿+MK-801组。模型组、推拿组和推拿+MK-801组结扎右侧坐骨神经干建立minor CCI大鼠模型；假手术组仅暴露右侧坐骨神经，不予结扎；正常组不予任何操作。正常组不予任何干预措施；模型组、假手术组造模后第7天予抓握束缚9 min;推拿组造模后第7天进行1次三法(点法、拨法、揉法)三穴(右侧“殷门”“承山”“阳陵泉”)干预，每法每穴干预1 min,共9 min;推拿+MK-801组造模后第5～7天鞘内注射MK-801,每次6μg(10μL),每日1次，最后一次鞘内注射30 min后再进行推拿干预，推拿具体操作同推拿组。造模前、造模后、干预后检测各组大鼠冷敏阈值(CST)和机械缩足反射阈值(MWT);干预后，免疫组织化学法检测腰4～6节段脊髓背角中环磷酸鸟苷(cGMP)蛋白阳性表达，蛋白质印迹法检测腰4～6节段脊髓背角中N-甲基-D-天冬氨酸受体1(NMDAR1)、神经源型一氧化氮合酶(nNOS)、可溶性鸟苷酸环化酶β(sGCβ)、蛋白激酶G1(PKG1)蛋白表达，实时荧光PCR法检测腰4～6节段脊髓背角中NMDAR1、nNOS、sGCβ、cGMP、PKG1 mRNA表达。结果 与正常组、假手术组比较，造模后模型组、推拿组和推拿+MK-801组CST升高，MWT降低(均P<0.05);干预后模型组腰4～6节段脊髓背角中cGMP蛋白阳性表达增多，NMDAR1、nNOS、sGCβ、PKG1蛋白表达增多，NMDAR1、nNOS、sGCβ、cGMP、PKG1 mRNA表达增多(均P<0.05)。与模型组比较，干预后推拿组和推拿+MK-801组CST降低，MWT升高(均P<0.05);推拿组、推拿+MK-801组腰4～6节段脊髓背角中cGMP蛋白阳性表达减少，NMDAR1、nNOS、sGCβ、PKG1蛋白表达减少，NMDAR1、nNOS、sGCβ、cGMP、PKG1 mRNA表达减少(均P<0.05)。结论 推拿干预1次后即可有效改善周围神经病理性疼痛引起的温度觉、机械痛觉过敏症状，可能是通过NMDAR1/cGMP/蛋白激酶G信号通路启动镇痛，从而发挥即刻镇痛作用。

关键词

推拿 / 神经病理性疼痛 / N-甲基-D-天冬氨酸受体1 / 脊髓背角 / 镇痛 / 大鼠

基金资助

国家自然科学基金项目(No.82274675,No.82074573); 北京市自然科学基金项目(No.7232278)