基于IL-17F/IL-17RC信号通路及M1小胶质细胞探讨“三法三穴”推拿手法即刻镇痛作用的机制

摘要

目的 通过观察“三法三穴”推拿手法对轻型慢性压迫性损伤(minor CCI)模型大鼠脊髓背角中白细胞介素-17F(IL-17F)、白细胞介素-17受体C(IL-17RC)、核转录因子-κB激活剂1(Act1)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)及M1型小胶质细胞表达的影响，探讨推拿对周围神经病理性疼痛的即刻镇痛机制。方法 将36只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、推拿组，12只/组，结扎右侧坐骨神经复制minor CCI模型。推拿组使用按摩推拿手法模拟仪在大鼠患侧殷门、承山、阳陵泉依次进行点法、拨法、揉法，假手术组及模型组仅抓握束缚，干预1次。采用机械痛实验与冷板实验评价即刻干预后大鼠对机械刺激、冷刺激的反应情况；采用蛋白质印迹法检测各组大鼠脊髓背角中IL-17F、TRAF6的蛋白表达情况；采用实时荧光PCR(RT-PCR)法检测各组大鼠脊髓背角中IL-17F、IL-17RC、Act1、TRAF6的mRNA表达情况；采用免疫荧光法检测各组大鼠脊髓背角中M1型小胶质细胞平均荧光强度。结果 行为学结果显示，干预前，与假手术组比较，模型组、推拿组大鼠机械缩足反射阈值(PMWT)降低，冷敏阈值升高；推拿手法干预后，与模型组比较，推拿组大鼠PMWT升高，冷敏阈值降低；与干预前比较，干预后推拿组大鼠PMWT升高，冷敏阈值降低(均P<0.05)。RT-PCR结果显示，与假手术组比较，模型组大鼠脊髓背角中IL-17F、IL-17RC、TRAF6、Act1的mRNA表达均升高；与模型组比较，推拿组大鼠上述指标mRNA表达均降低(均P<0.05)。蛋白质印迹法结果显示，与假手术组比较，模型组大鼠脊髓背角中IL-17F、TRAF6蛋白表达升高；与模型组比较，推拿组大鼠IL-17F、TRAF6蛋白表达降低(均P<0.05)。免疫荧光结果显示，与假手术组比较，模型组大鼠脊髓背角分化簇40(CD40)平均荧光强度增强；与模型组比较，推拿组大鼠CD40平均荧光强度减弱(均P<0.05)。结论 “三法三穴”推拿手法干预1次，其机制可能是通过抑制脊髓背角中IL-17F、IL-17RC、Act1、TRAF6的表达及M1型小胶质细胞的活化实现的，从而有即刻镇痛的作用。

关键词

推拿 / 小胶质细胞 / 殷门 / 承山 / 阳陵泉 / 大鼠

基金资助

国家自然科学基金项目(No.82074573,No.82274675); 北京市自然科学基金项目(No.7232278)