探讨“天麻-红景天”药对调控TNF-α/NF-κB保护低灌注-脑小血管病模型小鼠内皮细胞屏障的作用机制

摘要

目的 探讨“天麻-红景天”药对通过调控肿瘤坏死因子-α(TNF-α)/核因子κB(NF-κB),保护低灌注-脑小血管病小鼠内皮细胞屏障的作用机制。方法 将70只雄性C57BL/6小鼠分为假手术组、模型组、天麻-红景天1～3组(天麻与红景天质量比分别为1∶1、2∶1、1∶2),每组14只。采用单侧颈总动脉闭塞法制备脑小血管病小鼠模型。术后6 h灌胃1次，之后每24 h灌胃1次，天麻-红景天1～3组小鼠给药剂量分别为1.30、1.95、1.95 g/(kg·d),假手术组、模型组小鼠灌胃等体积生理盐水。在实验第3天(急性期)、第7天(亚急性期)进行脑血流量和行为学检测后取材。激光散斑衬比成像观察脑血流量的变化；步态分析仪评价运动协调能力；HE染色观察脑组织病理形态学变化；蛋白质印迹法检测白蛋白的表达水平；免疫荧光法和蛋白质印迹法检测咬合蛋白(Occludin)和闭锁连接蛋白-1(ZO-1)的表达水平；实时荧光PCR和蛋白质印迹法检测TNF-α、NF-κB、白细胞介素-β(IL-β)、白细胞介素-6(IL-6)的表达水平。结果 与假手术组比较，第3、7天模型组小鼠脑血流量降低(P<0.05);出现摆动时长延长、步频减少、步态平衡性降低(P<0.05)的步态异常情况；脑组织病理损伤严重，白蛋白表达水平升高，Occludin和ZO-1蛋白表达水平下降(P<0.05);TNF-α、NF-κB、IL-β、IL-6 mRNA及蛋白表达升高(P<0.05)。与模型组比较，第3、7天天麻-红景天各组小鼠脑血流量升高(P<0.05);摆动时长缩短、步频增加、步态平衡性升高(P<0.05);脑组织病理损伤减轻，白蛋白表达水平降低(P<0.05),Occludin和ZO-1蛋白表达水平升高(P<0.05);TNF-α、NF-κB、IL-β、IL-6的mRNA及蛋白表达降低(P<0.05)。其中，天麻-红景天2组在第3天综合疗效较好，天麻-红景天3组在第7天综合疗效更佳。结论 “天麻-红景天”药对能提高低灌注-脑小血管病小鼠脑血流量，改善步态异常，减轻脑组织病理损伤，保护内皮细胞屏障的功能和结构，其机制可能与降低炎症因子表达有关。

关键词

天麻 / 红景天 / 脑小血管病 / 内皮细胞屏障 / 小鼠

基金资助

国家自然科学基金项目(No.81873224); 第五批全国优秀中医临床人才研修项目(国中医药人教发[2022]239号)