复方扶芳藤合剂通过调控HSPA8改善异丙肾上腺素诱导心肌纤维化的机制研究

摘要

目的 本研究通过动物药效学、细胞生物学和网络药理学相结合的方法，评估复方扶芳藤合剂(CFM)对心肌纤维化(MF)的疗效并探究其作用靶点和机制。方法 35只雄性C57BL/6J小鼠按随机数字表分为正常组、模型组、CFM低、高(0.72、1.44 g/kg)剂量组和沙库巴曲缬沙坦钠组(20 mg/kg),每组7只。除正常组外，其余各组小鼠予以异丙肾上腺素(20 mg/kg)皮下多点注射，1次/d,连续21 d以建立MF模型。CFM组于造模前3 d开始灌胃预给药，沙库巴曲缬沙坦钠组于造模当日起给药，正常组和模型组予等量蒸馏水。采用超高效液相色谱法(UPLC)分析CFM有效成分；造模第7、14和21天通过超声检测小鼠左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)、左室舒张末期内径(LVIDd)及左室收缩末期内径(LVIDs);Masson染色评估小鼠心肌纤维化程度；酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠心肌组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原蛋白(COL I)和Ⅲ型胶原蛋白(COLⅢ)含量；免疫荧光法检测心肌组织α-SMA平均荧光强度。此外，通过整合细胞热转变分析(CETSA)、QE蛋白质谱检测及网络药理学技术，系统挖掘CFM改善MF潜在核心靶点及作用机制，并采用蛋白质印迹法进行验证。结果 从CFM中鉴定出8个主要化学成分。与正常组比较，模型组小鼠LVEF、LVFS降低，LVIDd、LVIDs升高，心脏重量与胫骨长度比值升高，胶原容积分数增加(P<0.05),MF程度加重。同时，心肌组织中TGF-β1、α-SMA、COL I和COLⅢ含量升高(P<0.05),α-SMA荧光信号表达强度增强。与模型组比较，CFM各剂量组和沙库巴曲缬沙坦钠组小鼠LVEF、LVFS升高，LVIDd、LVIDs及心脏重量与胫骨长度比值降低(P<0.05)。同时，胶原容积分数降低，心肌组织中TGF-β1、α-SMA、COL I和COLⅢ含量下调(P<0.05),MF程度减轻，α-SMA荧光信号表达强度减弱。此外，CETSA、QE蛋白质谱检测及网络药理学的联合分析结果显示：热激蛋白A家族成员8(HSPA8)可能是CFM改善MF的潜在核心靶点。CETSA和蛋白质印迹进一步证实，CFM可提高HSPA8蛋白的热稳定性，并下调小鼠心肌组织中HSPA8相对表达水平(P<0.05)。结论 CFM可改善异丙肾上腺素诱导的小鼠心功能障碍，减少胶原蛋白沉积，延缓MF病理进程，其机制可能与调控HSPA8有关。

关键词

复方扶芳藤合剂 / 异丙肾上腺素 / 心肌纤维化 / HSPA8 / 小鼠

基金资助

广西科技重大专项(No.AA23023035)