益肾通络方调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路改善糖尿病肾病小鼠细胞焦亡的机制研究

摘要

目的 研究益肾通络方通过调控Toll样受体4(TLR4)/髓系分化初级反应蛋白质88(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路，改善糖尿病肾病小鼠肾脏细胞焦亡的机制。方法 采用随机数字表法将60只C57BL/6雄性小鼠分为对照组(10只)和干预组(50只),干预组采用链脲佐菌素(STZ)腹腔注射(50 mg/kg)构建糖尿病肾病小鼠模型。造模成功后，采用随机数字表法将干预组进一步分为模型组、司美格鲁肽组(40μg/kg)和益肾通络方高(15.6 g/kg)、中(7.8 g/kg)、低(3.9 g/kg)剂量组。益肾通络方高、中、低剂量组灌胃相应剂量药物，司美格鲁肽组皮下注射司美格鲁肽注射液，对照组和模型组灌胃蒸馏水，连续12周。每4周监测各组小鼠随机血糖、生化法测定24 h尿蛋白含量；治疗后，采用生化法测定血清肌酐、尿素氮含量；称量小鼠肾脏质量，计算肾脏系数；苏木素-伊红、过碘酸-希夫、过碘酸六胺银和马松染色观察肾脏组织病理变化；酶联免疫吸附测定法检测尿液中β2微球蛋白(β2-MG)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)和肾损伤分子-1(KIM-1)水平；蛋白质印迹法和实时荧光PCR法检测肾脏组织中核苷酸结合结构域富含亮氨酸重复序列和含热蛋白结构域受体3(NLRP3)、胱天蛋白酶-1(Caspase-1)、焦孔素D(GSDMD)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)蛋白和mRNA表达；免疫组织化学法检测肾脏组织中TLR4、MyD88、NF-κB阳性染色面积占比。结果 与对照组比较，模型组小鼠随机血糖，24 h尿蛋白，血清肌酐、尿素氮含量及肾脏系数均升高，尿液β2-MG、NGAL、KIM-1水平升高，肾组织NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β和IL-18蛋白及mRNA表达升高，TLR4、MyD88、NF-κB蛋白阳性染色面积占比增多(P<0.05),肾组织可见肾小球肥大等病理改变。与模型组比较，益肾通络方高剂量组治疗12周后随机血糖降低(P<0.05);益肾通络方高、中剂量组小鼠24 h尿蛋白，血清肌酐、尿素氮含量及肾脏系数降低，尿液β2-MG、NGAL、KIM-1水平降低，肾组织NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β和IL-18蛋白及mRNA表达降低，TLR4、MyD88、NF-κB蛋白染色面积占比减少(P<0.05),肾组织病理损伤缓解。结论 益肾通络方可能通过调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路，抑制肾脏细胞焦亡，从而减轻糖尿病肾病小鼠的肾小管间质损伤，发挥肾保护作用。

关键词

糖尿病肾病 / 益肾通络方 / 细胞焦亡 / Toll样受体4/髓样分化因子88/核转录因子-κB信号通路 / 小鼠

基金资助

国家自然科学基金面上项目(No.82374382,No.82074361,No.82274293); 中央高校基本科研业务费专项资金资助项目揭榜挂帅项目(No.2023-JYB-JBZD-037); 国家中医药管理局高水平医院临床研究和成果转化能力提升试点项目揭榜挂帅项目(No.DZMG-XZYY-23002); 创新中药关键技术国家重点实验室开放课题(No.ZSL-003-02)