基于“虚-瘀-毒”病机的冠心病急性心肌梗死病证结合动物模型构建与评价研究

摘要

目的 构建并评价符合“虚-瘀-毒”病机的冠心病急性心肌梗死(AMI)病证结合小鼠模型。方法 将48只ICR小鼠按随机数字表法分为假手术组、正常饮食组、高胆碱组、氧化三甲胺(TMAO)组，1～8周各组给予相应的饮食、饮水干预处理；第9周开始时，正常饮食组、高胆碱组及TMAO组均给予冠状动脉(LAD)结扎术处理，假手术组只穿线不结扎，饮食饮水处理保持不变；从宏、微观表征不同层面，对小鼠的一般体征、体质量、饮食饮水量、二便、耳廓爪脚状态、行为学等数据进行采集比较，判断高胆碱干预AMI小鼠模型“虚-瘀-毒”的证候类型及指标变化；12周后，采用超声心动图、病理组织苏木精-伊红(HE)染色和Masson染色分别评估小鼠心功能、心肌组织细胞形态变化和心肌纤维化水平；最后，通过免疫荧光法观察各组小鼠心肌组织炎症因子荧光强度，评估模型稳定性和可靠性。结果 采集宏观体征发现，心肌梗死术后的各组小鼠体型消瘦、毛色无泽、精神萎靡、活动度降低，其中，高胆碱组和TMAO组小鼠对刺激反应更为迟钝。高胆碱组和TMAO组在1～4周呈现饮食量增加但体质量增长缓慢的特征，5～8周发展为“多饮、多食、体质量下降”趋势，并伴有小便黄赤、大便干燥等变化(P<0.01),9～12周术后体质量明显降低(高胆碱组最明显);高胆碱组和TMAO组表现出耳廓及爪脚红绿蓝值异常改变(P<0.01);行为学检测显示其旷场活动能力明显下降(P<0.01)。心功能及病理学检测发现，相较于假手术组及正常饮食组，高胆碱组和TMAO组小鼠心脏左心室舒张期容积和收缩期容积均升高(P<0.01)、射血分数和短轴缩短率均降低(P<0.01)、心脏指数升高(P<0.05);心肌组织HE染色表明，高胆碱组和TMAO组有较多心肌细胞核固缩、炎细胞浸润；Masson染色显示，高胆碱组和TMAO组梗死边缘区有大量蓝染胶原纤维分布，纤维化程度加重(P<0.05)。免疫荧光检测发现，相较于假手术组及正常饮食组，高胆碱组和TMAO组小鼠白细胞介导(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α荧光水平升高(P<0.01)。结论 高胆碱饮食结合LAD结扎能够成功构建“虚-瘀-毒”病机的冠心病AMI病证结合动物模型。该模型不仅体现了中医理论对冠心病“虚-瘀-毒”病机的认识，同时，为评价中药复方的干预效应及开展中医证候研究提供参考依据。

关键词

冠心病 / 急性心肌梗死 / 虚-瘀-毒 / 证候 / 病证结合 / 动物模型 / 小鼠

基金资助

国家重点研发计划项目(No.2022YFC3500104)