升麻素苷介导lncRNA NEAT1/miR-128-3p改善骨关节炎软骨细胞胆固醇代谢的机制研究

林艳铭; 涂海水; 兰书洁; 李超; 陆诗雨; 陈悦; 付长龙

北京中医药大学学报 ›› 2025, Vol. 48 ›› Issue (1) : 55 -67.

林艳铭, 涂海水, 兰书洁, 李超, 陆诗雨, 陈悦, 付长龙

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摘要

目的基于长链非编码RNA(lncRNA)核富集转录本1(NEAT1)/微小RNA-128-3p(miR-128-3p)通路，探讨升麻素苷改善骨关节炎软骨细胞胆固醇代谢的作用机制。方法体内实验中，将60只C57BL/6小鼠按随机数字表法分为正常组、假手术组、模型组和升麻素苷组，每组15只。模型组和升麻素苷组采用改良Hulth法构建骨关节炎小鼠模型。升麻素苷组小鼠灌胃升麻素苷[30 mg/(kg·d)],其余各组小鼠给予等量生理盐水，连续8周。采用苏木精-伊红(HE)染色法观察各组小鼠软骨组织结构；采用实时荧光PCR法检测各组小鼠软骨组织中lncRNA NEAT1和miR-128-3p mRNA水平变化；蛋白质印迹法检测各组小鼠关节软骨中ATP结合盒转运体A1(ABCA1)、肝X核激素受体β(LXRβ)、基质金属蛋白-3(MMP-3)和B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)的蛋白表达情况；酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组小鼠关节滑液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量；生化微板法检测各组小鼠关节滑液中总胆固醇水平。体外实验中，按实验需求分为空白对照组、白细胞介素-1(IL-1β)组、IL-1β+升麻素苷组、IL-1β+lncRNA NEAT1过表达(oe-lncRNA NEAT1)组、IL-1β+oe-lncRNA NEAT1+升麻素苷组、IL-1β+miR-128-3p抑制组、IL-1β+miR-128-3p抑制+升麻素苷组。采用IL-1β诱导软骨细胞24 h构建骨关节炎模型，各组分别给予升麻素苷(90 mg/L)及miR-128-3p抑制剂(50 nmol/L)干预48 h。采用荧光原位杂交检测lncRNA NEAT1在软骨细胞中的表达；双荧光素酶检测lncRNA NEAT1和miR-128-3p之间的靶向关系；采用慢病毒质粒过表达lncRNA NEAT1转染小鼠软骨细胞；实时荧光PCR法检测软骨细胞中lncRNA NEAT1过表达对miR-128-3p mRNA水平的影响；蛋白质印迹法检测lncRNA NEAT1过表达和miR-128-3p抑制后，软骨细胞中ABCA1、LXRβ、MMP-3和Bax的蛋白表达。结果 HE染色结果显示，升麻素苷可明显改善骨关节炎软骨组织结构损伤。实时荧光PCR结果表明，与模型组比较，升麻素苷组软骨组织中的lncRNA NEAT1 mRNA水平降低，miR-128-3p mRNA水平升高(均P<0.05)。蛋白质印迹法结果显示，在软骨组织中，与模型组比较，升麻素苷组中ABCA1和LXRβ蛋白表达升高，而MMP-3和Bax蛋白表达降低(均P<0.05)。ELISA结果显示，与模型组比较，升麻素苷组中TNF-α含量降低(P<0.05)。与模型组比较，升麻素苷组中小鼠关节滑液的总胆固醇水平降低(P<0.05)。荧光原位杂交结果显示，与IL-1β组比较，IL-1β+升麻素苷组中lncRNA NEAT1的平均荧光强度减弱(P<0.05)。双荧光素酶检测提示，与miR-NC组比较，结合lncRNA NEAT1-WT质粒的miR-128-3p mimics组中的相对荧光素酶活性降低(P<0.05)。实时荧光PCR结果显示，与IL-1β+oe-lncRNA NEAT1组比较，IL-1β+oe-lncRNA NEAT1+升麻素苷组的lncRNA NEAT1 mRNA水平降低，miR-128-3p mRNA水平升高(均P<0.05)。蛋白质印迹法结果表明，与IL-1β+升麻素苷组比较，IL-1β+oe-lncRNA NEAT1+升麻素苷组和IL-1β+miR-128-3p抑制+升麻素苷组中ABCA1和LXRβ蛋白表达降低，MMP-3和Bax蛋白表达升高(均P<0.05)。结论升麻素苷可介导lncRNA NEAT1/miR-128-3p改善骨关节炎软骨细胞胆固醇代谢。