滋阴明目方调控GRP78/IRE1/ATF6通路改善视网膜色素变性的体外研究

摘要

目的 探讨滋阴明目方改善视网膜色素变性的作用机制。方法 将20只SD大鼠按随机数字表法分为空白血清组和滋阴明目方含药血清组，每组10只。滋阴明目方含药血清组大鼠灌胃滋阴明目方(46.875 g/kg),空白血清组大鼠灌胃蒸馏水。制备滋阴明目方含药血清及空白血清，采用液质联用技术分析滋阴明目方含药血清的化学成分。采用衣霉素干预人视网膜色素上皮(ARPE-19)细胞构建内质网应激损伤模型。CCK-8法筛选滋阴明目方含药血清最优体积分数。将ARPE-19细胞分为空白组、模型组、空白血清组、滋阴明目方含药血清组、牛磺熊去氧胆酸组，分别进行干预。干预24 h后，采用多时间动态细胞功能分析系统对细胞进行形态观察，CCK-8法检测各组细胞存活率，Annexin V-FITC/PI法检测各组细胞凋亡率，蛋白质印迹法和微滴式数字PCR法检测各组细胞葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、1型内质网转膜蛋白激酶(IRE1)、活化转录因子6(ATF6)的蛋白及mRNA表达。结果 液质联用分析得到滋阴明目方含药血清中包含熊果苷、水杨酸、木犀草素、丹酚酸A、刺桐碱、牛磺酸、檞皮素、麦芽酚、黄芩苷、丹参素等主要化学成分。与模型组比较，滋阴明目方含药血清组细胞数量增多，生长较均匀，漂浮的死亡ARPE-19细胞及碎片减少；滋阴明目方含药血清组和牛磺熊去氧胆酸组的细胞存活率均升高，细胞凋亡率均下降(均P<0.05);滋阴明目方含药血清组GRP78、IRE1、ATF6蛋白表达降低，牛磺熊去氧胆酸组IRE1、ATF6蛋白表达降低(均P<0.05);滋阴明目方含药血清组和牛磺熊去氧胆酸组GRP78、IRE1、ATF6 mRNA表达降低(均P<0.05)。结论 滋阴明目方可以减少ARPE-19细胞内质网应激损伤模型的细胞凋亡，其分子机制可能与下调GRP78、IRE1、ATF6的表达，抑制细胞内质网应激反应有关。

关键词

滋阴明目方 / 人视网膜色素上皮细胞系-19 / 内质网应激 / 葡萄糖调节蛋白78/1型内质网转膜蛋白激酶/活化转录因子6通路 / 凋亡

基金资助

国家自然科学基金面上项目(No.82074196,No.82004427); 湖南省自然科学基金项目(No.2023JJ40474); 湖南省教育厅科学研究项目(No.23B0347); 湖南省重点实验室建设项目(No.2017TP1018)