三七总皂苷抑制JNK/c-Jun信号通路干预钙化性主动脉瓣疾病的效应及机制研究

摘要

目的 探讨三七总皂苷调控c-Jun氨基端激酶（JNK）/c-Jun信号通路改善小鼠钙化性主动脉瓣疾病的作用与机制。方法 将21只6～8周龄雄性ApoE^-/-小鼠，按随机数字表法分为模型组、三七总皂苷高剂量组（60 mg/kg）、三七总皂苷低剂量组（30 mg/kg）,每组7只；另设9只6～8周龄雄性C57BL/6小鼠为对照组。予对照组小鼠普通饲料饲养，予ApoE^-/-小鼠高脂饲料饲养12周。12周后，随机选取ApoE^-/-小鼠每组各1只和C57BL/6小鼠3只，评估造模效果。确认造模成功后，予三七总皂苷高、低剂量组小鼠每日灌胃相应药物，对照组、模型组小鼠灌胃等体积生理盐水，连续4周。治疗结束后，超声检测各组小鼠瓣环直径、峰值流速；硝酸银（von Kossa）染色、茜素红S染色评估主动脉瓣钙化程度；生化法检测甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平；酶联免疫吸附试验检测血清白细胞介素-4（IL-4）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-10（IL-10）含量；免疫组织化学法检测钙化标志物Runt相关转录因子2（RUNX2）、骨形态发生蛋白2（BMP2）阳性染色率；TUNEL染色评估主动脉瓣细胞凋亡情况；实时荧光PCR、免疫荧光检测JNK/c-Jun信号通路相关指标mRNA表达和平均荧光强度。结果 与对照组比较，模型组小鼠血清TC、TG、LDL-C、TNF-α、IL-1β升高，IL-4、IL-10降低，瓣环直径减小，峰值流速升高，von Kossa、茜素红S染色阳性面积占比增多，主动脉瓣细胞凋亡率升高，BMP2、RUNX2阳性染色率增加，JNK与c-Jun mRNA表达水平、p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun均升高（均P<0.05）。与模型组比较，三七总皂苷低剂量组小鼠血清TC、LDL-C、TNF-α降低，瓣环直径增大，峰值流速降低，茜素红S染色阳性面积减少，BMP2、RUNX2阳性染色率、JNK和c-Jun mRNA表达水平、p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun均降低（均P<0.05）;三七总皂苷高剂量组血清HDL-C、IL-4、IL-10升高，TC、LDL-C、TNF-α、IL-1β降低，瓣环直径增大，峰值流速降低，von Kossa与茜素红S染色阳性面积占比减少、细胞凋亡染色率降低，BMP2与RUNX2阳性染色率降低，JNK、c-Jun mRNA表达水平及p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun均降低（均P<0.05）。结论 三七总皂苷可通过抑制JNK/c-Jun信号通路，减少瓣膜细胞凋亡，降低炎症水平，减轻小鼠主动脉瓣钙化程度。

关键词

三七总皂苷 / 细胞凋亡 / c-Jun氨基端激酶/c-Jun信号通路 / 主动脉瓣 / 钙化性主动脉瓣疾病 / 小鼠

基金资助

国家自然科学基金青年基金项目(No.82104679); 中国中医科学院基本科研业务费优秀青年科技人才培养专项(No.ZZ15-YQ-004);中国中医科学院西苑医院能力提升项目(No.XYZX0101-37,No.YJMPSC202422)