结肠炎相关结直肠癌小鼠模型的中医证候动态探究

摘要

目的 构建结肠炎相关结直肠癌(colitis-associated colorectal cancer, CAC)小鼠模型的中医证候动态评价体系，探索“炎癌转化”进程中的免疫学机制，为CAC病证结合研究提供参考。方法 采用氧化偶氮甲烷(AOM)/葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导CAC模型，将32只SPF级C57BL/6J Nifdc小鼠据随机数字表法分为对照组8只和模型组24只。基于DSS干预周期，模型组在模型构建4、7、10周设立3个动态时间窗，每个时间窗8只小鼠，分别记为1、2、3周期模型组。监测小鼠体质量、摄食饮水量、粪便含水率、疾病活动指数(DAI)、红外热成像温度、舌象三原色(RGB)值等宏观体征指标，进行证候动态评价；记录结肠肿瘤数量与结肠长度，计算肿瘤负荷数，结合结肠组织病理评价炎症及异型增生水平，免疫荧光双标法检测经典激活的巨噬细胞(M1型)/替代激活的巨噬细胞(M2型)表面标志物CD86与CD206阳性率，酶联免疫吸附法检测白细胞介素-12(IL-12)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、CXC趋化因子9(CXCL9)与白细胞介素-10(IL-10)、血管内皮生长因子(VEGF)、CC趋化因子配体17(CCL17)含量，探究CAC“炎癌转化”的免疫学机制。结果 1周期模型组，小鼠摄食饮水量下降，出现倦怠懒动、蜷缩聚堆等脾虚症状，且粪便含水率明显升高(P<0.01),证属脾虚痰湿；肿瘤负荷数与肿瘤数量较少，结肠组织结构轻度异常，见部分炎症细胞浸润；与对照组比较，CD86/CD206阳性率和M1/M2型巨噬细胞因子增多(P<0.05或P<0.01)。2周期模型组，小鼠摄食饮水量达峰值，出现精神亢奋、易怒多动、小便色黄、便血等热象，粪便含水率较1周期模型组下降(P<0.01),且核心和体表平均温度与舌色r值较1周期模型组升高(P<0.05或P<0.01)并达到峰值，揭示其热毒炽盛的病机，证属脾经湿热；结肠组织结构中度异常，见炎症细胞浸润及少量管状腺瘤；与1周期模型组比较，CD86阳性率和M1型巨噬细胞因子增多(P<0.05或P<0.01),CD206阳性率与M2型巨噬细胞因子差异无统计学意义。3周期模型组，小鼠形瘦神萎，体质量、摄食饮水量均达最低，且皮毛晦暗易掉毛、脓血便，粪便含水率达到峰值，远高于各组(P<0.05或P<0.01);同时，3周期模型组的肿瘤负荷数、肿瘤数量与DAI评分出现爆发式增长，高于1、2周期模型组(P<0.05或P<0.01),结合核心与体表平均温度的回落及舌色g、b值升高(P<0.05或P<0.01)的青紫舌特征，表明该阶段病机热久成瘀、痰热互结发为瘀毒，证属湿热瘀毒；结肠组织结构高度异常，见重度炎症细胞浸润及大量管状腺瘤；此外，3周期模型组较1、2周期模型组，CD206阳性率与M2型细胞因子增多(P<0.01)。结论 CAC模型证候遵循脾虚痰湿→脾经湿热→湿热瘀毒的证候演变规律，其与巨噬细胞M1/M2极化失衡进程同步，脾虚痰湿证可能对应免疫监视初期状态，脾经湿热证与M1型极化主导的炎症反应增强相关，湿热瘀毒证则与M2型极化介导的免疫抑制微环境相关。本研究为理解病—证关系的潜在生物学机制提供了新的理论模型，值得后续研究予以验证。

关键词

结肠炎相关结直肠癌 / 病证结合模型 / 炎癌转化 / 脾虚 / 小鼠

基金资助

国家自然科学基金项目(No.82104706); 中央高校基本科研业务费专项资金(No.2023-JYB-JBZD-039); 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(No.ZZ19-YQ-034); 北京市科协智库培育基地项目; 北京中医药大学大学生创新计划项目(No.X202510026051)