表没食子儿茶素没食子酸酯诱导巨噬细胞极化增强抗肿瘤免疫反应的机制研究

摘要

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）通过干扰素基因刺激因子（STING）信号通路诱导巨噬细胞极化的作用机制。方法 采用SPF级6～8周龄雄性C57BL/6小鼠建立Lewis肺癌移植瘤小鼠模型，以随机数字表法将24只构建成功的小鼠分为对照组、EGCG组、顺铂（DDP）组，每组8只。小鼠皮下肿瘤体积约80 mm³开始给药。EGCG组腹腔注射EGCG溶液50 mg/kg,每日1次；DDP组腹腔注射DDP溶液2 mg/kg, 1周3次；对照组腹腔注射同剂型、同容积的生理盐水，每日1次。连续14 d。观察小鼠一般情况和体质量变化，观察各组小鼠移植瘤的体积变化和抑瘤率，苏木精-伊红染色观察各组小鼠心脏、肝脏、肾脏的变化，流式细胞术检测肿瘤组织肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）中经典激活的巨噬细胞（M1型）/替代激活的巨噬细胞（M2型）极化标记分子表达和免疫细胞比例，免疫荧光法检测肿瘤组织中肿瘤相关巨噬细胞表型的变化，蛋白质印迹法检测STING信号通路蛋白表达。结果 给药期间，各组小鼠体质量未发现明显变化。与对照组比较，EGCG组和DDP组可以抑制小鼠移植瘤生长（P<0.01）,并且重要脏器安全性良好。流式细胞术结果显示，与对照组比较，EGCG组M2型巨噬细胞的特异性表面标志物CD206的阳性细胞比例降低（P<0.01）、M1型TAMs的特征性标志物CD86的表达则升高（P<0.05）,DDP组CD206的阳性细胞比例降低（P<0.05）;免疫微环境变化，与对照组比较，EGCG组肿瘤组织中CD8⁺T细胞、树突状细胞（DC）的浸润比例增加（P<0.05）、调节性T细胞（Treg）和髓源性抑制细胞（MDSCs）的比例降低（P<0.05）,DDP组DC比例升高、Treg和MDSCs比例降低（P<0.05）。免疫荧光分析结果，与对照组比较，EGCG组和DDP组CD206表达减少，CD86表达增加（P<0.05、P<0.01）;蛋白质印迹法检测，与对照组比较，EGCG组STING、TANK结合激酶1（TBK1）、磷酸化TBK1、干扰素调节因子3（IRF3）、磷酸化IRF3的蛋白表达增加（P<0.05、P<0.01）,DDP组STING蛋白表达增加（P<0.05）。结论 EGCG通过激活STING信号通路，促进TAMs由M2型向M1型的极化，重塑非小细胞肺癌的免疫抑制微环境，增强抗肿瘤免疫应答。

关键词

非小细胞肺癌 / 表没食子儿茶素没食子酸酯 / 巨噬细胞极化 / 免疫微环境 / 小鼠

基金资助

国家自然科学基金项目(No.82172760); 中央高水平中医医院临床科研业务费资助项目(No.CZ015)