基于PTP1B探讨芪术抗癌方调控同、异源黏附串扰抑制结肠癌转移的作用机制

摘要

目的 探讨芪术抗癌方调控同、异源黏附串扰关键蛋白蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)抑制结肠癌转移的作用机制。方法 制备空白血清及芪术抗癌方含药血清。采用液质联用技术分析芪术抗癌方含药血清的有效化学成分。通过质粒转染，体外构建HCT116细胞的PTP1B过表达模型(OE-PTP1B HCT116)。CCK-8法检测OE-PTP1B HCT116存活率后选择20%空白血清及5%、10%、20%芪术抗癌方含药血清。采用划痕实验、transwell实验和黏附实验分别检测细胞迁移、侵袭及黏附情况，采用蛋白质印迹法检测PTP1B、黏着斑蛋白(vinculin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、整合素αν亚单位(integrin ανsubunit)、整合素β3亚单位(integrin β3 subunit)蛋白表达水平。结果 液质联用分析得到芪术抗癌方含药血清中12个主要有效化学成分，含量最高的是毛蕊异黄酮苷。OE-PTP1B HCT116细胞PTP1B、vinculin蛋白表达升高(均P<0.05),表明模型构建成功。与空白血清组比较，不同体积分数的芪术抗癌方含药血清组存活率降低(均P<0.05)。与空白血清组比较，10%、20%芪术抗癌方含药血清组伤口愈合率下降，各芪术抗癌方含药血清组侵袭细胞数均减少，各芪术抗癌方含药血清组黏附在细胞上的HCT116细胞数量均增加、黏附在基质凝胶上的HCT116细胞数量减少；与空白血清组比较，20%芪术抗癌方含药血清组E-cadherin蛋白表达水平升高(均P<0.05),PTP1B、vinculin、integrin ανsubunit、integrin β3 subunit蛋白表达降低。结论 芪术抗癌方抑制结肠癌转移的作用机制可能与通过调控以PTP1B为核心介导的同、异源黏附串扰有关。

关键词

芪术抗癌方 / 结肠癌 / 蛋白酪氨酸磷酸酶1B / 同源黏附 / 异源黏附 / 大鼠

基金资助

国家自然科学基金项目(No.82274116); 江苏省中医药科技发展专项(No.2020ZX01)