含笑内酯对骨髓增殖性肿瘤细胞系UKE-1和SET-2中细胞因子表达的作用及机制研究

摘要

目的 探讨含笑内酯通过信号传导和转录激活因子3(STAT3)/核转录因子-κB (NF-κB)信号通路，对骨髓增殖性肿瘤细胞系中细胞因子表达的影响。方法 选取人肿瘤衍生细胞(UKE-1)和人急性巨核细胞白血病细胞(SET-2)作为研究对象，采用CCK-8法筛选含笑内酯的实验浓度，将UKE-1和SET-2分别分为对照组和2.5、5.0、10.0μmol/L含笑内酯组，各给药组分别加入终浓度为2.5、5.0、10.0μmol/L含笑内酯溶液1 mL,对照组仅加入等体积的培养基。采用实时荧光PCR法检测各组细胞白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和趋化因子2(CCL2) mRNA表达抑制率，采用蛋白印迹法检测各组细胞STAT3、磷酸化STAT3 (p-STAT3)的蛋白表达水平。以UKE-1为研究对象，进行还原性谷胱甘肽和双硫苏糖醇的逆转实验，将UKE-1分为对照组、含笑内酯组、含笑内酯+还原性谷胱甘肽组、含笑内酯+双硫苏糖醇组、还原性谷胱甘肽和双硫苏糖醇组，采用蛋白印迹法检测各组细胞STAT3、p-STAT3的蛋白表达水平。采用TNF-α(5μg/L)刺激UKE-1,以复制细胞因子过度分泌的病理模型，将UKE-1分为对照组、模型组及2.5、5.0、10.0μmol/L含笑内酯组，采用实时荧光PCR法检测上述指标，酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组细胞培养基中CCL2含量，蛋白质印迹法检测STAT3、p-STAT3及NF-κB信号通路相关蛋白的蛋白表达水平。结果 实时荧光PCR法结果显示，与对照组比较，2.5、5.0、10.0和20.0μmol/L含笑内酯组UKE-1在24、48、72 h的增殖抑制率均升高，5.0、10.0和20.0μmol/L含笑内酯组SET-2在48、72 h的增殖抑制率均升高(均P<0.05),为排除高浓度含笑内酯可能导致细胞数量减少对后续结果的影响，后续研究选用2.5、5.0和10.0μmol/L。与对照组比较，2.5、5.0和10.0μmol/L含笑内酯组UKE-1及SET-2的TNF-α mRNA表达抑制率均升高，5.0、10.0μmol/L含笑内酯组UKE-1及SET-2的IL-1β mRNA表达抑制率亦升高，10.0μmol/L含笑内酯组UKE-1及SET-2中CCL2 mRNA表达抑制率升高(均P<0.05)。使用TNF-α刺激后，与模型组比较，2.5、5.0、10.0μmol/L含笑内酯组UKE-1中TNF-α、IL-1β、CCL2 mRNA表达抑制率均升高(均P<0.05)。ELISA法结果显示，与对照组比较，模型组UKE-1中CCL2含量升高；与模型组比较，2.5、5.0、10.0μmol/L含笑内酯组UKE-1中CCL2含量降低(均P<0.05)。蛋白质印迹法结果显示，与对照组比较，5.0、10.0μmol/L含笑内酯组UKE-1和SET-2中p-STAT3蛋白表达水平下调，SET-2中STAT3蛋白表达水平下调(均P<0.05);还原性谷胱甘肽和双硫苏糖醇逆转实验中，与对照组比较，含笑内酯组UKE-1中p-STAT3表达水平降低，与含笑内酯组比较，含笑内酯+双硫苏糖醇组和含笑内酯+还原型谷胱甘肽组UKE-1中p-STAT3蛋白表达水平升高(均P<0.05);使用TNF-α刺激后，与对照组比较，模型组p-STAT3、磷酸化核转录因子-κB激酶亚基α/β(p-IκKα/β)、磷酸化IκBα(p-IκBα)、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白表达升高，IκBα蛋白表达降低，与模型组比较，2.5、5.0、10.0μmol/L含笑内酯组p-IκKα/β、p-IκBα、p-STAT3、p-NF-κB p65蛋白表达降低，5.0、10.0μmol/L含笑内酯组IκBα蛋白表达升高(均P<0.05)。结论 含笑内酯能够抑制UKE-1和SET-2中IL-1β、TNF-α和CCL2 mRNA表达，以及UKE-1细胞对CCL2的分泌，这种抑制作用可能与其抑制STAT3的磷酸化激活及NF-κB信号通路的激活相关。

关键词

含笑内酯 / 骨髓增殖性肿瘤 / 细胞因子 / 信号传导和转录激活因子3 / 核转录因子-κB

基金资助

国家自然科学基金项目(No.82104785); 天津市名中医传承工作室建设项目(No.tjmzy2406)