护肾痛风泰对尿酸性肾病模型小鼠18β-甘草次酸及TLR4/MyD88信号通路的影响

凌桂晨; 陈婌娟; 李志岭; 杨朔; 张剑勇; 谢静静

北京中医药大学学报 ›› 2026, Vol. 49 ›› Issue (4) : 498 -511.

凌桂晨, 陈婌娟, 李志岭, 杨朔, 张剑勇, 谢静静

作者信息 +

Author information +

文章历史 +

摘要

目的探讨护肾痛风泰改善尿酸性肾病模型小鼠肾脏损伤的作用机制。方法 SPF级C57BL/6J雄性小鼠60只，其中30只小鼠采用随机数字表法分为正常组(n=8)、造模组(n=8)、护肾痛风泰低剂量组(n=7,33.47 g/kg)、护肾痛风泰高剂量组(n=7,66.93 g/kg)。正常组小鼠采用0.5%羧甲基纤维素钠灌胃及腹腔注射，其余组采用氧嗪酸钾(300 mg/kg)腹腔注射联合次黄嘌呤(250 mg/kg)灌胃建立尿酸性肾病模型。造模同时，正常组和造模组灌胃等体积蒸馏水，给药组灌胃相应药物，每日1次，连续14 d。采用酶比色法检测小鼠血清尿酸(UA)、肌酐(Cr)及尿素氮(BUN)含量；Masson染色观察小鼠肾组织病理改变；采用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)结合自建数据库开展肠道代谢组学分析，筛选、鉴定关键代谢产物，并通过基因本体论功能注释及京都基因与基因组百科全书进行基因注释及功能富集分析。其余30只小鼠同样方法造模，采用随机数字表法分为模型组(n=8)、护肾痛风泰组(n=8,33.47 g/kg)、18β-甘草次酸低剂量组(n=7,50 mg/kg)、18β-甘草次酸高剂量组(n=7,100 mg/kg)。造模同时，模型组灌胃等体积蒸馏水，给药组灌胃相应药物，每日1次，连续14 d。采用酶比色法检测小鼠血清UA含量；荧光定量PCR法检测小鼠结肠组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-10(IL-10)mRNA表达；AB-PAS染色观察小鼠结肠组织形态及黏液分泌情况；免疫荧光法检测小鼠结肠组织紧密连接蛋白1(ZO-1)、闭锁蛋白(Occludin)及E-钙黏蛋白(E-cadherin)荧光表达；蛋白质印迹法检测小鼠结肠组织ZO-1、Occludin、E-cadherin、磷酸化Toll样受体4(p-TLR4)、磷酸化髓系分化初级反应蛋白质88(p-MyD88)蛋白表达。结果与正常组比较，造模组小鼠UA、Cr、BUN含量升高(P<0.05),肾组织病理可见间质纤维化。与造模组比较，护肾痛风泰低、高剂量组小鼠血清UA、Cr、BUN含量降低(P<0.05),肾组织病理损伤减轻。代谢组学分析和富集分析结果显示，护肾痛风泰干预后小鼠肠道代谢谱发生改变，主要上调代谢物为18β-甘草次酸，主要富集于Toll样受体4(TLR4)/髓系分化初级反应蛋白质88(MyD88)信号通路。进一步研究发现，与模型组比较，18β-甘草次酸低、高剂量组小鼠血清UA含量降低，结肠组织IL-6、IL-1β mRNA表达降低，IL-10 mRNA表达升高，结肠黏液分泌水平提高，ZO-1、Occludin、E-cadherin蛋白表达升高，p-TLR4、p-MyD88蛋白表达降低(P<0.05)。结论护肾痛风泰可能通过上调关键代谢产物18β-甘草次酸水平，修复肠道屏障功能并抑制TLR4/MyD88信号通路介导的炎症信号传导，改善尿酸性肾病小鼠的肾功能与组织损伤。