基于卵母细胞线粒体探究补肾养精汤改善高龄不孕症的作用机制

摘要

目的 基于线粒体探究补肾养精汤改善高龄不孕症的机制。方法 采用C57BL/6J小鼠，雌性6～8周龄15只、10月龄45只，雄性6～8周龄10只。雌性6～8周龄小鼠为青年组，10月龄小鼠随机数字表法分为高龄组、脱氢表雄酮(DHEA)组和补肾养精汤组。DHEA组和补肾养精汤组分别给予DHEA 11.26 mg/(kg·d)、补肾养精汤11.41 g/(kg·d),青年组和高龄组给予同等体积生理盐水，连续干预45 d。收集各组卵母细胞，进行体外受精，观察卵母细胞、成熟卵母细胞和受精卵数量；实时荧光PCR法检测卵母细胞线粒体DNA(mtDNA)拷贝数，采用线粒体绿色荧光探针观察线粒体分布情况，JC-1试剂盒检测卵母细胞线粒体膜电位；实时荧光PCR和蛋白质印迹法检测卵母细胞线粒体融合蛋白(Mfn)2 mRNA和蛋白表达水平。结果 与青年组相比，高龄组小鼠获卵数、成熟率和体外受精率均明显下降(P<0.01);卵母细胞mtDNA拷贝数减少、分布异常率增加、膜电位下降，差异均具有统计学意义(P<0.01);Mfn2 mRNA和蛋白表达均下调(P<0.01)。与高龄组相比，补肾养精组小鼠卵母细胞、成熟卵母细胞数量和体外受精率均明显增加(P<0.05),卵母细胞mtDNA拷贝数增加(P<0.05),异常分布率降低，膜电位上调(P<0.05),Mfn2 mRNA和蛋白表达均上调(均P<0.01)。与DHEA组相比，补肾养精组小鼠卵母细胞、成熟卵母细胞数量和体外受精率增加，卵母细胞mtDNA拷贝数增加、异常分布率降低、膜电位上调，Mfn2 mRNA和蛋白表达上调，其中卵母细胞数量和Mfn2蛋白表达差异具有统计学意义(均P<0.05)。结论 补肾养精汤可能通过上调Mfn2 mRNA和蛋白表达，改善卵母细胞线粒体的数量、分布和功能，从而提高卵母细胞质量，这是临床应用补肾养精汤改善卵巢功能、治疗高龄不孕症的可能机制之一。

关键词

高龄不孕症 / 卵母细胞 / 线粒体 / 线粒体融合蛋白2 / 补肾养精汤 / 小鼠

基金资助

国家自然科学基金项目(No.82104917); 山东省自然科学基金项目(No.ZR2019PH053); 山东省中医药科技项目(No.2020Q030,Q-2023009); 山东省中医药重点学科(鲁卫中医药科教字[2022]4号)