白术转腰汤对大鼠腰椎黄韧带纤维化及M2巨噬细胞TGF-β1介导炎症反应的影响

摘要

目的 探讨白术转腰汤(《辨证录》转腰汤加鸡血藤、苏木、牛膝)对腰椎黄韧带纤维化的影响及其免疫调控机制。方法 (1)采用随机数字表法将24只雄性SD大鼠分为4组，即正常组、模型组、氯磷酸盐组和白术转腰汤组，每组6只。除正常组外，其余各组均采用腰椎失稳法建立黄韧带纤维化模型。白术转腰汤组灌胃白术转腰汤(13.6 g/kg),其余各组给予等量生理盐水灌胃，每天1次，持续30 d。氯磷酸盐组于造模手术后即刻及第9、18、27天沿原切口皮下注射氯磷酸二钠脂质体(5 g/L,0.5mL)。30 d后过量麻醉处死大鼠，采用HE染色和Masson染色对大鼠黄韧带进行组织学评估，计算胶原容积分数(CVF);采用免疫组化染色法检测黄韧带中转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)蛋白表达，采用免疫荧光双标法检测M2巨噬细胞中CD163与TGF-β1蛋白表达。(2)使用RT-qPCR法检测M2巨噬细胞与成纤维细胞单独培养、共培养，及经过白术转腰汤含药血清预处理的M2巨噬细胞与成纤维细胞共培养3种方式下，M2巨噬细胞与成纤维细胞TGF-β1、TNF-α和IL-1β的mRNA表达。结果 (1)与正常组比较，模型组大鼠可见黄韧带纤维致密、扭曲，免疫细胞浸润，CVF增加，黄韧带组织中TGF-β1、TNF-α、IL-1β蛋白表达增加(P<0.05);与模型组比较，氯磷盐酸组与白术转腰汤组细胞外基质堆积改善，黄韧带CVF降低，黄韧带组织中TGF-β1、TNF-α、IL-1β蛋白表达降低(P<0.05);与氯磷盐酸组比较，白术转腰汤组细胞外基质堆积增加，CVF升高，黄韧带组织中TGF-β1、IL-1β蛋白表达升高(P<0.05);免疫荧光结果提示，正常组与氯磷盐酸组未见CD163、TGF-β1蛋白表达，模型组CD163和TGF-β1蛋白大量表达并共定位，白术转腰汤组可见较多CD163蛋白表达，但TGF-β1蛋白表达极少。(2)与单独培养比较，共培养增加了M2巨噬细胞中TGF-β1、IL-1β及成纤维细胞中TNF-α、IL-1β的mRNA表达，而经过白术转腰汤含药血清预处理后的共培养下，M2巨噬细胞中TGF-β1、IL-1β和成纤维细胞中TNF-α、IL-1β的mRNA表达较未预处理的共培养降低(P<0.05)。结论 白术转腰汤可抑制大鼠腰椎黄韧带纤维化进程，降低M2巨噬细胞中TGF-β1和IL-1β的表达，并影响成纤维细胞TNF-α和IL-1β的表达，从而抑制M2巨噬细胞TGF-β1介导的免疫炎症反应，发挥抑制黄韧带炎症-纤维化正反馈的作用。

关键词

白术转腰汤 / 转化生长因子-β1 / 免疫炎症反应 / 黄韧带纤维化 / 大鼠 / M2巨噬细胞

基金资助

国家中医药管理局国家中医药传承创新团队项目(No.ZYYCXTD-C-202003);国家中医药管理局中西医结合与少数民族医药司政府购买服务项目(No.ZYZB-2022-798); 北京市中医药科技发展资金项目(No.JJ-2020-72); 中国中医科学院望京医院高水平中医医院建设项目(No.WJZJ-202318)