免疫检查点抑制剂相关心肌炎小鼠模型的中医证候研究

摘要

目的 构建稳定的免疫检查点抑制剂相关心肌炎(ICIM)小鼠病证结合模型，并对宏观表征和微观指标进行全面评价，探索其中医证候演变规律。方法 20只SPF级C57BL/6J雄性小鼠任意分为模型组和对照组，每组10只。依据小鼠体质量，模型组小鼠第8天开始腹腔注射抗小鼠程序性死亡受体1(25 mg/kg)、细胞毒性T淋巴细胞抗原4(25 mg/kg)体内专用单抗，对照组小鼠腹腔注射抗小鼠IgG2a体内专用同型对照抗体(50 mg/kg),每3 d一次，共5次。第28天，超声心动图评价小鼠心功能，包括左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)、左心室收缩末期容积(LVESV)、左心室舒张末期容积(LVEDV);苏木精-伊红(HE)、Masson染色观察小鼠心肌组织病理形态；酶联免疫吸附测定法检测小鼠血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)含量。每周观测小鼠中医证候宏观体征，连续4周。每周的周四(即第4、11、18、25天)观察小鼠一般情况，进行抓力测定实验检测小鼠前肢抓力，旷场实验测定小鼠5 min内运动距离，并测定肛温；每周的周五(即第5、12、19、26天)进行负重力竭游泳实验，测定爪温，以及舌面、双下肢爪心红绿蓝(RGB)值。结果 与对照组比较，模型组小鼠LVEF、LVFS降低，LVESV、LVEDV升高(P<0.05);血清cTnI、TNF-α、IL-6含量升高(P<0.05);HE、Masson染色结果显示，模型组小鼠心脏组织排列紊乱，免疫细胞浸润与纤维化明显。与对照组比较，模型组小鼠第3、4周毛发稍枯槁发黄，精神不振，活动减少，爪甲不荣；负重力竭游泳时间、前肢抓力降低，肛温升高(P<0.05)。与对照组比较，模型组小鼠第4周旷场实验5 min内运动距离降低(P<0.05)。与第1周比较，模型组小鼠第4周舌面r值升高、g值降低(P<0.05),b值差异无统计学意义。结论 综合宏观表征和微观指标的检测结果，ICIM模型小鼠的中医证候呈动态性演变，从第3周的气虚证演变为第4周的气阴两虚证。

关键词

免疫检查点抑制剂相关心肌炎 / 病证结合 / 气阴两虚证 / 小鼠

基金资助

国家自然科学基金项目(No.82374420,No.82174364); 非传染性慢性病国家科技重大专项(No.2023ZD0502605); 京津冀基础研究合作项目(No.J230033); 北京中医药大学科技处项目(No.2022-JYB-JBZR-001,No.BZY-BZX-2022-08); 中国中科医学创新基金中医药理论传承与创新项目(No.KYG-202403)