加味少腹逐瘀汤调控EGFR/PI3K/AKT信号通路诱导子宫内膜细胞自噬的作用机制

杨亚玲; 王婉润; 张作良; 王家兴; 林祥羽; 武权生

北京中医药大学学报 ›› 2024, Vol. 47 ›› Issue (9) : 1191 -1202.

杨亚玲, 王婉润, 张作良, 王家兴, 林祥羽, 武权生

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摘要

目的从表皮生长因子受体（EGFR）/磷酸肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）信号通路介导异位子宫内膜组织细胞自噬角度探讨加味少腹逐瘀汤治疗子宫内膜异位症的潜在分子机制。方法 72只雌性SD大鼠按照随机数字表法分为空白组、模型组、孕三烯酮组及加味少腹逐瘀汤高、中、低剂量组，每组12只。采用自体移植法构建子宫内膜异位症模型。孕三烯酮组大鼠灌胃孕三烯酮混悬液0.25 mg/（kg·d）,加味少腹逐瘀汤高、中、低剂量组大鼠分别灌胃加味少腹逐瘀汤水煎剂30、15、7.5 g/（kg·d）,空白组及模型组大鼠灌胃等量生理盐水，连续4周。给药结束后，每只大鼠给予缩宫素2 U诱发宫缩，观察大鼠疼痛情况；记录大鼠异位子宫内膜组织的质量和体积；苏木素-伊红（HE）染色法观察各组大鼠子宫内膜组织病理变化；透射电镜观察各组大鼠子宫内膜组织超微结构；酶联免疫吸附测定法检测各组大鼠血清中雌二醇（E₂）、孕酮（P）、白细胞介素-1β（IL-β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-β（TGF-β）、表皮生长因子（EGF）、EGFR含量；免疫荧光法检测各组大鼠子宫内膜组织中重组人自噬效应蛋白Beclin 1（Beclin-1）、微管相关蛋白1轻链3（LC3B）平均荧光强度；蛋白质印迹法检测各组大鼠子宫内膜组织中EGFR、PI3K、磷酸化磷酸肌醇3-激酶（p-PI3K）、AKT、磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）的蛋白表达水平；实时荧光PCR法检测EGFR、PI3K、AKT mRNA表达水平。结果与空白组比较，模型组大鼠出现典型扭体反应，腹壁可见异位子宫内膜组织，HE结果显示，异位内膜组织增厚，间质增生，腺体扩张；超微结构仅见自噬小体，部分视野未见明显自噬结构；大鼠血清E₂、IL-6、IL-1β、TNF-α、TGF-β、EGF、EGFR含量升高，P含量降低；自噬相关蛋白Beclin-1、LC3B平均荧光强度降低；EGFR、PI3K、AKT、p-PI3K、p-AKT蛋白表达升高；EGFR、PI3K、AKT mRNA表达升高（均P<0.05）。与模型组比较，孕三烯酮组及加味少腹逐瘀汤高、中剂量组大鼠扭体次数减少、扭体反应潜伏时间延长；异位子宫内膜组织体积及质量减小；HE结果显示，病理损伤程度减轻；超微结构不同程度出现溶酶体、自噬溶酶体、自噬小体结构；血清E₂、IL-6、IL-1β、TNF-α、TGF-β、EGF、EGFR含量降低，P含量升高；自噬相关蛋白Beclin-1、LC3B平均荧光强度升高；EGFR、PI3K、AKT、p-PI3K、p-AKT蛋白表达降低；EGFR、PI3K、AKT mRNA表达降低（均P<0.05）。结论加味少腹逐瘀汤治疗子宫内膜异位症的机制可能与诱导EGFR/PI3K/AKT信号通路介导的异位子宫内膜组织自噬、减轻炎性反应有关。