基于Wnt3a/β-catenin/TCF4/GPX4信号通路探讨加味少腹逐瘀汤介导子宫内膜异位症大鼠异位子宫内膜组织铁死亡的机制研究

摘要

目的 探讨加味少腹逐瘀汤通过无翅型MMTV整合位点家族成员3A(Wnt3a)/β-连环蛋白(β-catenin)/T细胞转录因子4(TCF4)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)信号通路介导异位子宫内膜组织铁死亡的潜在分子机制。方法 将84只SPF级雌性SD大鼠按随机数字表法分为空白组(n=12)、假手术组(n=12)及造模组(n=60)。空白组不予任何处理，假手术组仅开腹，造模组采用自体移植联合冰水浴建立子宫内膜异位症寒凝血瘀证大鼠模型。将成模大鼠分为模型组、孕三烯酮组[0.25 mg/(kg·3 d)]、加味少腹逐瘀汤低剂量组[7.5 g/(kg·d)]、加味少腹逐瘀汤中剂量组[15.0 g/(kg·d)]及加味少腹逐瘀汤高剂量组[30.0 g/(kg·d)]。灌胃4周后，进行中医证候评分及扭体实验，然后取材。记录大鼠异位组织大小；使用HE染色、普鲁士蓝染色和透射电镜观察异位组织病理改变；酶联免疫吸附测定法检测血清转化生长因子β1(TGF-β1)含量；微板法检测异位组织中还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量；蛋白质印迹法和实时定量PCR法分别测定异位组织中Wnt3a、β-catenin、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、TCF4、GPX4蛋白及mRNA相对表达量。结果 与空白组比较，模型组大鼠寒凝血瘀证证候评分增加(P<0.05);异位内膜上皮组织形态类似在位内膜组织，上皮组织铁沉积减少，细胞内线粒体数量增加；血清TGF-β1含量升高(P<0.05);异位内膜组织中GSH升高(P<0.05);异位内膜组织中Wnt3a、β-catenin、Cyclin D1、TCF4、GPX4蛋白及mRNA表达升高(P<0.05)。与模型组比较，加味少腹逐瘀汤中、高剂量组证候评分降低(P<0.05);孕三烯酮组和加味少腹逐瘀汤中、高剂量组扭体反应潜伏期延长、扭体次数减少(P<0.05),异位子宫内膜组织体积缩小(P<0.05),异位内膜组织和腺体组织中出现不同程度的铁沉积增加、细胞缩小及脱落等情况，细胞内线粒体出现嵴模糊、空泡、外膜破裂等现象；各给药组大鼠血清TGF-β1含量下降(P<0.05),异位内膜组织中GSH、MDA含量下降(P<0.05),Wnt3a、β-catenin、Cyclin D1、TCF4、GPX4蛋白及mRNA表达下降(P<0.05)。结论 加味少腹逐瘀汤可能通过影响Wnt3a/β-catenin/TCF4/GPX4信号通路关键蛋白，抑制异位子宫内膜组织增殖能力、诱导异位子宫内膜组织铁死亡，从而改善子宫内膜异位症寒凝血瘀证症状。

关键词

子宫内膜异位症 / 加味少腹逐瘀汤 / 无翅型MMTV整合位点家族成员3A信号通路 / 铁死亡 / 寒凝血瘀证 / 大鼠

基金资助

国家自然科学基金项目(No.81760879,No.82260949)