基于NF-κB对Nav1.7的调控探讨祛风宣肺方治疗难治性慢性咳嗽的机制

王瑛琦; 马晓勿; 马建岭; 季坤; 史利卿; 李扭扭; 王丽云; 温绍惠; 张珑菲; 刘松

北京中医药大学学报 ›› 2026, Vol. 49 ›› Issue (5) : 614 -622.

王瑛琦, 马晓勿, 马建岭, 季坤, 史利卿, 李扭扭, 王丽云, 温绍惠, 张珑菲, 刘松

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摘要

目的探究祛风宣肺方对于神经源性炎症引起的咳嗽高敏感性豚鼠的治疗作用及其机制。方法 30只豚鼠按照随机数字表法分为空白组、模型组、祛风宣肺方组、普瑞巴林组、电压门控钠通道（Nav）1.7抑制剂组，每组6只。除空白组外，其他各组豚鼠腹腔注射环磷酰胺(3×10^-2 g/kg)进行免疫抑制；2 d后腹腔注射1 mL含2 mg卵蛋白、100 mg氢氧化铝的生理盐水致敏；3周后再次腹腔注射1 mL含0.01 mg卵蛋白、100 mg氢氧化铝的生理盐水加强致敏。空白组腹腔注射等量生理盐水。加强致敏3周后，予1%卵蛋白溶液雾化吸入激发，以激发后3 min内咳嗽次数≥10次且伴有典型咳嗽行为者判定为造模成功。造模成功后，祛风宣肺方组予祛风宣肺方（5 g/kg）灌胃；空白组和模型组予等体积生理盐水灌胃；普瑞巴林组予普瑞巴林溶液(3×10^-2 g/kg)灌胃；Nav1.7抑制剂组予Nav1.7抑制剂PF-05089771溶液（100μmol/L）雾化吸入，每次20 min。每日1次，干预7 d。观察豚鼠一般状态，采用辣椒素雾化刺激测定豚鼠的咳嗽次数，酶联免疫吸附测定法检测血清白细胞介素（IL）-4、IL-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量，实时荧光PCR法检测背根神经节Nav1.7、P物质（SP）、核因子κB（NF-κB）p65 mRNA表达，蛋白质印迹法检测背根神经节Nav1.7、SP、NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65（p-NF-κB p65）蛋白表达。结果与空白组比较，模型组豚鼠出现呼吸频率加快、频繁咳嗽、腹肌明显收缩、前肢前伸、颈前伸及张口呼吸等典型咳嗽行为，且一般状态较差，表现为进食量减少、饮水次数下降、活动度稍减、喜蜷卧、精神状态萎靡、被毛蓬松；辣椒素刺激后咳嗽次数增加，血清IL-4、IL-6、IL-1β和TNF-α含量上升，背根神经节Nav1.7、SP、NF-κB p65 mRNA表达升高，Nav1.7、SP、p-NF-κB p65蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65均升高（P<0.05）。与模型组比较，各给药组豚鼠随给药时间延长自发咳嗽次数减少，进食、饮水逐渐恢复，活动度增加，精神状态好转，被毛渐趋光泽；辣椒素引起的咳嗽次数减少，血清IL-4、IL-6、IL-1β和TNF-α含量降低，祛风宣肺方组和Nav1.7抑制剂组豚鼠背根神经节Nav1.7、SP、NF-κB p65 mRNA表达降低，Nav1.7、SP、p-NF-κB p65蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65均下降（P<0.05）。结论祛风宣肺方能有效缓解咳嗽高敏感性豚鼠的咳嗽症状，其机制可能为通过抑制背根神经节NF-κB信号通路活性，进而下调Nav1.7表达，从而减轻神经源性炎症。