补肾调经方调控白血病抑制因子及其受体对高龄小鼠卵巢颗粒细胞增殖与类固醇激素分泌的影响

摘要

目的 探讨补肾调经方促进高龄小鼠卵巢颗粒细胞增殖和类固醇激素合成的作用机制。方法 将20只7～8周龄雌性ICR小鼠作为对照组（灌胃蒸馏水）,80只9～10月龄雌性ICR小鼠按随机数字表法平均分为模型组（灌胃蒸馏水）、补肾调经方低剂量组[灌胃补肾调经方（25.6 g/kg）]、补肾调经方高剂量组[灌胃补肾调经方（51.2 g/kg）]、白血病抑制因子（LIF）抑制剂组[灌胃补肾调经方（51.2 g/kg）+腹腔注射EC330(5.0×10^-4 g/kg)]。各组每日灌胃或腹腔注射1次，连续30 d。采用阴道脱落细胞涂片法观察小鼠动情周期变化，ELISA法检测性激素水平，定量反转录PCR及蛋白质印迹法检测颗粒细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、类固醇急性调节蛋白（StAR）、3β-羟基类固醇脱氢酶（3β-HSD）、细胞色素P450家族19A1（CYP19A1）、LIF、LIF受体（LIFR）的mRNA及蛋白表达水平，免疫组织化学法检测LIF及LIFR表达情况。结果 与对照组比较，模型组小鼠动情周期紊乱、周期延长（P<0.05）,雌二醇（E₂）、孕酮（P₄）水平降低（P<0.05）,卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）水平及FSH/LH值升高（P<0.05）,颗粒细胞PCNA、Cyclin D1、StAR、3β-HSD、CYP19A1、LIF及LIFR mRNA和蛋白表达水平降低（P<0.05）。与模型组比较，补肾调经方各组小鼠动情周期较规律，动情周期缩短（P<0.05）,E₂、P₄水平升高（P<0.05）,FSH、LH水平及FSH/LH值降低（P<0.05）,颗粒细胞PCNA、Cyclin D1、StAR、3β-HSD、CYP19A1、LIF及LIFR mRNA和蛋白表达水平升高（P<0.05）。与补肾调经方高剂量组比较，LIF抑制剂组小鼠动情周期紊乱、周期延长（P<0.05）,E₂、P₄水平降低（P<0.05）,FSH、LH水平及FSH/LH升高（P<0.05）,颗粒细胞PCNA、Cyclin D1、StAR、3β-HSD、CYP19A1及LIFR mRNA和蛋白表达水平降低（P<0.05）。结论 补肾调经方可能是通过上调LIF及其受体，介导颗粒细胞增殖及类固醇激素合成，从而改善卵巢储备功能、促进卵泡发育。

关键词

补肾调经方 / 白血病抑制因子 / 颗粒细胞 / 类固醇激素 / 小鼠

基金资助

国家自然科学基金项目(No.82405455); 河北省自然科学基金项目(No.H2022423331); 河北省中医药管理局科研计划项目(No.2023122,2023124); 河北省高等学校科学技术研究项目(No.QN2024039); 河北省属高校基本科研业务费专项(No.TDZR2024001)