自噬抑制剂3-MA对脑缺血再灌注损伤大鼠脑内炎症反应的影响

摘要

目的 研究自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine, 3-MA)对局灶性脑缺血再灌注大鼠缺血侧脑组织趋化因子受体2(C-X-C chemokine receptor type 2, CXCR2)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)、环氧化酶2(cyclooxygenase-2,COX2)的影响，探究脑缺血再灌注损伤过程中自噬对炎症的作用。方法 将雄性SD大鼠采用随机数字表法分为：假手术(Sham)组、大脑中动脉梗死(middle cerebral artery occlusion, MCAO)组和MCAO再灌注24 h+3-MA(3-MA)组，每组5只。按照改良线栓法制作MCAO大鼠模型，模拟缺血90 min。3-MA组大鼠于MCAO前腹腔注射10 mg/kg 3-MA。所有组别大鼠均再灌注24 h。达到再灌注时间后将大鼠处死，迅速断头、取脑，应用Western blotting法检测大鼠缺血侧脑组织CXCR2蛋白水平，免疫荧光染色法检测脑组织冰冻切片缺血半暗带区炎症因子TNF-α、 IL-1β及COX2阳性细胞数量，并分别对IL-1β、COX2进行细胞定位。结果 (1)MCAO组大鼠再灌注24 h缺血脑组织CXCR2蛋白水平比Sham组明显升高(P<0.05)。3-MA组大鼠缺血侧脑组织CXCR2蛋白水平比MCAO组显著减少(P<0.05)。(2) Sham组大鼠脑内偶见TNF-α、IL-1β和COX2阳性细胞，而MCAO组大鼠脑缺血半暗带区TNF-α、IL-1β和COX2阳性细胞数量均比Sham组显著升高(P<0.05)。相较于MCAO组，给予自噬抑制剂3-MA的缺血大鼠脑组织半暗带区中TNF-α、IL-1β和COX2阳性细胞数量均显著降低(P<0.05)。(3)IL-1β和COX2在脑缺血大鼠缺血半暗带区内分别与神经元标志物NeuN共定位。结论 自噬抑制剂3-MA降低脑缺血再灌注大鼠缺血侧脑组织中CXCR2表达以及炎症因子TNF-α、 IL-1β和COX2的阳性细胞数量，从而减轻脑缺血后的炎症反应，说明自噬是促进脑缺血后炎症反应的因素之一。

关键词

脑缺血再灌注损伤 / 炎症 / 自噬