N-乙酰半胱氨酸对冻融人卵巢组织的保护作用

摘要

目的 以首都医科大学附属北京妇产医院生育力保护中心现有冻存复苏方案为基础，以雌性去势裸鼠为模型，通过人冻融卵巢组织异种移植探讨抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(N-Acetyl-L-Cysteine, NAC)对人卵巢组织的保护作用。方法 将4例患者的卵巢组织按照原有冻融方案和改良方案(加入NAC)进行冻融，所有患者取材后留取新鲜卵巢组织进行钙黄绿素AM(Calcein acetoxymethyl ester, Calcein-AM)和苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining, HE)染色评估卵泡活性并计数。将36只雌性去势裸鼠随机分为4组，将复苏后的卵巢组织移植于双侧裸鼠肾被膜下，按照移植卵巢组织的冻融方案分为原有冻融方案组(control group),改良方案组(NAC group),卵巢去势组(ovariectomy group)和正常对照组(normal group,不进行手术)。分别在移植第3天、第7天、第21天处死裸鼠，取血清及卵巢组织移植物。采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)法检测血清雌二醇(estradiol, E2)、卵泡刺激素(follicle stimulating hormone, FSH)和抗苗勒管激素(anti-mullerian hormone, AMH)水平，取卵巢组织移植物1片用于HE染色观察卵泡发育情况，1片用于总抗氧化能力(total antioxidant capability, TAC)的检测。结果 移植后各时间点两移植组卵泡发育分级差异无统计学意义(P>0.05)。NAC组总抗氧化能力显著高于control组(P<0.05),与新鲜卵巢组织相比差异无统计学意义(P>0.05)。移植第3天control组裸鼠血清中E2水平显著高于卵巢去势组(P<0.05),余各时间点两移植组与卵巢去势组差异无统计学意义(P>0.05)。移植后第3天和第21天两移植组裸鼠血清中FSH水平低于卵巢去势组(P<0.05),与正常对照组差异无统计学意义(P>0.05)。移植后第3天control组AMH显著高于卵巢去势组(P<0.05),与其余各组差异无统计学意义(P>0.05),移植第7天两移植组AMH水平下降，显著低于正常对照组(P<0.05),移植第21天两移植组AMH水平均显著高于卵巢去势组(P<0.05),与正常对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论 原有冻存方案及改良冻存方案均能有效恢复卵巢组织的内分泌功能。与原有冻存方案相比，NAC改良方案能够提高移植卵巢组织的抗氧化能力，并减少移植初期原始卵泡的激活，保存更多的原始卵泡数量。

关键词

N-乙酰半胱氨酸 / 原始卵泡 / 卵泡激活 / 卵泡丢失 / 卵巢储备