体外诱导小鼠单核细胞向 Kupffer细胞分化的方法建立及特征鉴定

摘要

目的 建立一种体外诱导小鼠骨髓单核细胞向Kupffer细胞分化的方法，以用于Kupffer细胞的体外研究。方法 从小鼠骨髓中分离单核细胞，经过巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor, M-CSF)、转化生长因子-β1(transforming growth factor 1,TGF-β1)和δ样蛋白4 (delta-like protein 4,DLL4)联合诱导后，采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction, qPCR)法检测骨髓单核细胞来源Kupffer细胞(induced monocyte-derived Kupffer cells, iMoKCs)中表面标志物C型凝集素结构域家族4F(C-type lectin domain family 4, member f, CLEC4F)、C型凝集素结构域家族1B(C-type lectin domain family 1, member b, CLEC1B)和含免疫球蛋白结构域蛋白4(V-set and immunoglobulin domain containing 4, VSIG4)mRNA水平的表达情况；通过免疫荧光的方法检测iMoKCs中蛋白质CLEC4F的表达；利用流式细胞分析技术评估iMoKCs的吞噬功能，用细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)检测iMoKCs的增殖活性。结果 从小鼠骨髓中分离的单核细胞，经过24 h的联合诱导，在mRNA水平即可表达Clec4f、Clec1b和Vsig4,并表达蛋白质CLEC4F,流式细胞术分析显示吞噬生物颗粒的iMoKCs约占总细胞数量的80%,CCK-8检测在第24 h、48 h、72 h, iMoKCs数量分别为初始数量(0 h)的1.4、2.0和2.9倍。结论 M-CSF、TGF-β1和DLL4联合诱导可在体外成功将骨髓单核细胞分化成为iMoKCs,并且具有吞噬与增殖的能力，可替代原代Kupffer细胞进行体外研究。

关键词

小鼠 / Kupffer细胞 / 吞噬 / 增殖 / 体外诱导 / 单核细胞