基于NLRP3/IL-18/NF-κB通路探讨化痰安神方改善神经元细胞凋亡的作用机制

摘要

目的 基于核因子激活的B细胞的NOD-样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor pyrin domain-containing protein 3, NLRP3)/白细胞介素-18(interleukin-18, IL-18)/κ-轻链(nuclear factor-activated B cellκ-light chain, NF-κB)信号通路探讨化痰安神汤抑制神经元细胞凋亡的作用机制。方法 体外培养HT22小鼠海马神经元细胞，C57小鼠灌胃化痰安神方后制备含药小鼠血清，CCK-8法筛选化痰安神方含药血清最佳干预浓度。采用不同浓度含药血清处理HT22细胞后，予脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导其发生凋亡，CCK-8法L-乳酸脱氢酶(L-lactate dehydrogenase, L-LDH)生化检测法和Annexin V/PI染色法用于检测细胞损伤与凋亡情况，Western blotting法用于测定通路相关蛋白P-NF-κB/NF-κB、凋亡相关的斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing, ASC)、NLRP3、Caspase-1的表达，酶联免疫吸附测定法用于测定IL-18的表达。过表达NLRP3后重复试验，进行单基因功能验证。结果 化痰安神方含药血清可改善LPS诱导的细胞损伤和凋亡，降低细胞L-LDH浓度(P<0.05);显著下调NLRP3/IL-18/NF-κB信号通路相关蛋白的转录表达(P<0.05);显著降低细胞内IL-18浓度；同时过表达NLRP3可逆转化痰安神方含药血清对HT22细胞凋亡抑制作用(P<0.05)。结论 化痰安神方能够通过抑制NLRP3/IL-18/NF-κB信号通路改善神经元细胞凋亡。

关键词

化痰安神方 / HT22细胞 / 凋亡 / NLRP3/IL-18/NF-κB信号通路 / 炎症小体