PILRB通过影响CCL2及CCL5细胞因子分泌促进前列腺癌进展的作用与机制研究

摘要

目的 研究配对免疫球蛋白样2型受体β（paired immunoglobin like type 2 receptor beta, PILRB）在前列腺癌中的表达情况和对前列腺肿瘤细胞增殖迁移和侵袭功能的影响及相关机制。方法 在前列腺癌细胞中使用siRNA（small interfering RNA, siRNA）干扰PILRB表达，应用实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR）信使RNA（messenger RNA, mRNA）表达水平。免疫组化染色和蛋白质印迹（Western blotting, WB）检测PILRB及相关蛋白的表达情况。细胞计数试剂盒8（cell counting kit-8, CCK8）、平板划痕、免疫荧光和Transwell实验检测前列腺癌细胞在体外实验中的增殖、迁移和侵袭能力。使用免疫缺陷裸鼠探究PILRB在动物体内的促癌作用。结果 PILRB在高Gleason评分的前列腺癌组织中蛋白表达水平显著高于低Gleason评分的前列腺癌组织。CCK8增殖实验、平板划痕实验与Transwell侵袭实验共同提示干扰PILRB会明显抑制前列腺癌细胞的增殖（22RV1:1.054±0.054 vs 1.959±0.032,t=40.574,P<0.001;PC3:1.606±0.535 vs 2.178±0.479,t=22.497,P<0.01;DU145:1.290±0.184 vs 2.147±0.597,t=38.750,P<0.01）、侵袭（单位：个/视野）(siPILRB-2:11.500±3.271 vs 101.667±12.909,t=16.584,P<0.001)、迁移（siPILRB-2:67.125±1.178 vs 81.588±1.454,t=21.855,P<0.001;si-CCL2:63.100±3.019 vs 81.588±1.454,t=15.602,P<0.001）。酶联免疫吸附实验（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）结果表明干扰PILRB能抑制癌细胞分泌C-C基序趋化因子配体2（C-C motif chemokine ligand 2, CCL2）、C-C基序趋化因子配体5（C-C motif chemokine ligand 5, CCL5）(pg/mL)（CCL2:82.450±3.075 vs 92.061±4.925,t=4.966,P<0.01;CCL5:796.558±11.606 vs 816.300±19.965,t=2.564,P<0.05;CSF-1:92.771±5.276 vs 106.787±10.016,t=3.714,P<0.05）。同时WB结果显示siPILRB-2组CCL2蛋白相对表达量显著低于si-Control组（PILRB:0.305±0.007 vs 0.706±0.016,t=54.668,P<0.05;CCL2:0.149±0.005 vs 0.522±0.204,t=43.221,P<0.05）,siPILRB-2组CCL5蛋白浓度略低于si-Control组（CCL5:0.204±0.005 vs 0.220±0.014,t=2.468,P<0.05）。在体内实验中，干扰PILRB的裸鼠皮下移植瘤体积（mm³）明显更小（shPILRB:585.920±117.582 vs 1 314.462±234.633,t=6.207,P<0.001）。结论 PILRB表达在前列腺癌细胞中明显升高，通过促进前列腺癌细胞中CCL2、CCL5的分泌，调控单核细胞与巨噬细胞向M2型分化，最终促进前列腺癌细胞的进展，PILRB有可能成为抑制前列腺癌进展的潜在治疗靶点。

关键词

前列腺癌 / PILRB / CCL2 / CCL5 / 增殖迁移 / 免疫组化 / 体内实验