STAT3抑制剂WP1066对MYCN扩增型神经母细胞瘤增殖的抑制作用

摘要

目的 探究小分子药物WP1066对MYCN扩增型神经母细胞瘤(neuroblastoma, NB)增殖的抑制作用及分子机制。方法 从26种获美国食品药品监督管理局(Food and Drug Administration, FDA)批准或处于临床试验阶段的儿童药物中，筛选出对MYCN扩增型NB细胞SK-N-BE(2)杀伤效果最显著的药物WP1066。使用不同浓度梯度WP1066处理MYCN扩增型NB细胞SK-N-BE(2)、IMR32,MYCN非扩增型NB细胞SH-SY5Y、SK-N-AS,人视网膜上皮细胞hTERT RPE-1,采用CellTiter-Glo、结晶紫染色、克隆形成等实验检测细胞增殖及活力，Caspase3/7试剂盒检测细胞凋亡，Western blotting检测信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)和p-STAT3蛋白水平的表达，实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction, RT-qPCR)检测抗凋亡分子Bcl-2 mRNA水平的表达。结果 CellTiter-Glo结果显示，WP1066对MYCN扩增型NB细胞SK-N-BE(2)、IMR32杀伤效果显著(P<0.05),相同浓度下对MYCN非扩增型NB细胞SH-SY5Y、SK-N-AS,人视网膜上皮细胞hTERT RPE-1的影响不显著。结晶紫染色和克隆形成实验也显示出同样的实验结果。Caspase3/7检测细胞凋亡结果显示，WP1066显著促进MYCN扩增型NB细胞SK-N-BE(2)凋亡(P<0.05),但是对MYCN非扩增型NB细胞SH-SY5Y没有显著影响。在机制方面，小分子药物WP1066通过抑制SK-N-BE(2)细胞p-STAT3水平及其下游抗凋亡分子Bcl-2的表达水平(P<0.05),进而抑制NB细胞活力。结论 WP1066对MYCN扩增型NB细胞增殖有显著的抑制作用，有望成为MYCN扩增型NB的候选治疗药物。

关键词

神经母细胞瘤 / MYCN基因扩增 / WP1066 / 信号转导和转录激活因子3 / 磷酸化STAT3 / 细胞增殖