正常小鼠颞骨矢状面切片与内耳神经密度测定技术

摘要

目的 从颞骨矢状面切片的观察角度，建立定量观察内耳毛细胞、神经元及其神经纤维的新方法。方法 采用4只出生后45 d CBA/CaJ小鼠的颞骨，将2.5%戊二醛磷酸盐缓冲液灌入内耳腔并将颞骨浸泡固定6 h,再将颞骨浸入2%四氧化锇溶液中浸泡2 h。颞骨经脱钙、脱水及包埋后，沿着颞骨矢状面切取半薄切片（2μm）并用0.5%甲苯胺蓝染色。在光学显微镜下的小视野范围内，对毛细胞、神经元及神经纤维进行定量观察。结果 从平行颞骨内侧壁的平面切片开始收集与观察。当切开颞骨内侧壁进入耳蜗神经孔和前庭上神经孔时，即可得到对应神经束及前庭下神经束中枢端神经纤维的横断切片。当切到椭圆囊斑和上半规管壶腹嵴及外半规管壶腹嵴的横断截面时，获得上述结构所含毛细胞的横断面切片，同时也获得前庭上神经元细胞体及其两端神经纤维的横断面切片。当切到球囊斑和后半规管壶腹嵴的横断截面时，获得其中所含毛细胞的横断面切片，同时也获得前庭下神经元的细胞体及其两端神经纤维的横断面切片。切到耳蜗骨性螺旋板的横断截面时，获得螺旋神经节外周端神经纤维的横断面切片。在切到蜗轴的横断截面，可获得耳蜗毛细胞和螺旋神经节的横断面切片。本实验发现正常小鼠各个前庭感觉上皮区的毛细胞平均密度为（18.67±1.88）/180μm。耳蜗底回中部单个疆孔内的螺旋神经节外周端神经纤维的数量为（57.83±9.09）根。耳蜗螺旋神经节和前庭上神经元及前庭下神经元的平均密度为（20.39±2.23）/0.007 5 mm²。耳蜗神经束和前庭下神经束及前庭上神经束的中枢端神经纤维的平均密度为（497.06±25.28）/0.007 5 mm²。结论 颞骨矢状面切片的观察角度有利于对内耳神经系统做出全方位的细胞学定量评估。

关键词

颞骨 / 矢状面切片 / 耳蜗 / 前庭 / 神经

基金资助

国家自然科学基金项目(82171147,82071050,81973913); 科技部国家重点研发计划(2023YFC2410205); 四川省自然基金(2023NSFC0621)