AGR2通过调控TGF-β/SMAD信号通路对鼻咽癌细胞迁移和侵袭的影响

摘要

目的 探讨前梯度蛋白2(AGR2)调控转化生长因子-β(TGF-β)/信号转导蛋白(SMAD)信号通路对鼻咽癌(NPC)细胞迁移和侵袭的影响。方法 体外培养人正常鼻咽上皮细胞(NP69)和NPC细胞(5-8F、6-10B、CNE-1),实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定细胞中AGR2 mRNA表达。将5-8F细胞随机分为对照组(Control组)、转染阴性对照组(sh-NC组)、敲低AGR2组(sh-AGR2组)、敲低AGR2+TGF-β信号通路激活剂SRI-011381组(sh-AGR2+SRI-011381组)。qRT-PCR及蛋白质印迹(Western blot)测定各组AGR2的表达；CCK8和克隆形成测定细胞增殖；划痕实验测定细胞迁移；Transwell实验测定细胞侵袭；流式细胞仪测定细胞凋亡；Western blot测定细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、TGF-β1、磷酸化SMAD家族成员2/SMAD家族成员2(p-SMAD2/SMAD2)表达。结果 与NP69细胞相比，NPC细胞中AGR2 mRNA表达升高；与Control组或sh-NC组相比，sh-AGR2组细胞的OD450、克隆数、划痕愈合率、侵袭数、PCNA、MMP-2、MMP-9、TGF-β1、p-SMAD2/SMAD2表达水平下降，细胞凋亡率升高(P<0.05);与sh-AGR2组相比，sh-AGR2+SRI-011381组细胞的OD450、克隆数、划痕愈合率、侵袭数、PCNA、MMP-2、MMP-9、TGF-β1、p-SMAD2/SMAD2表达水平升高，细胞凋亡率下降(P<0.05)。结论 AGR2在NPC细胞中表达水平升高，进而促进NPC细胞的增殖、迁移及侵袭能力，抑制细胞凋亡。这可能是通过调控TGF-β/SMAD信号通路实现。

关键词

鼻咽癌 / 前梯度蛋白2 / 转化生长因子-β/SMAD信号通路 / 细胞迁移 / 细胞侵袭