不同剂量乌司他丁对劳力型热射病大鼠血浆二胺氧化酶活性及D-乳酸浓度的影响研究

Study on the effects of different doses of ulinastatin on plasma diamine oxidase activity and D-lactic acid concentration in rats with exertional heat stroke

摘要

目的 探讨不同剂量乌司他丁（ulinastatin，UTI）对劳力型热射病（exertional heat stroke，EHS）大鼠肠黏膜屏障的保护作用。 方法 本研究选取雄性SD大鼠134只，并采用随机分组的方式，将其划分为以下4组：空白对照组（Normal-Control，n=8）、劳力型热射病组（EHS，n=42）、小剂量乌司他丁治疗组（SUTI-EHS，n=42）、大剂量乌司他丁治疗组（LUTI-EHS，n=42）。对于EHS组、SUTI-EHS组和LUTI-EHS组这3组大鼠，通过施加热应激并配合运动的方式构建EHS模型。待模型构建成功之后，立刻通过尾静脉分别给3组大鼠注射2 mL浓度为0.9%的氯化钠溶液、2×10⁴ U/kg UTI、5×10⁴ U/kg UTI，每组随机取10只大鼠观察各组大鼠存活时间、8 h病死率，其余大鼠于发病后30 min、2 h、4 h、6 h 4个时间点，检测血浆二胺氧化酶（diamine oxidase，DAO）活性及D-乳酸浓度，同时对小肠组织进行病理学检查与损伤评分。 结果 与EHS组相比，SUTI-EHS、LUTI-EHS 2组大鼠的存活时间显著延长［（3.705±1.849） h vs. （6.618±3.169） h，（3.705±1.849） h vs. （9.748±5.551） h，均P<0.05］，8 h病死率明显下降（100% vs. 50%，100% vs. 30%，均P<0.05）。EHS组大鼠血浆DAO活性及D-乳酸浓度在发病后迅速升高，0.5 h达峰，随后逐渐下降，各时间点均高于对照组，LUTI-EHS组和SUTI-EHS组DAO水平均低于同期EHS组。重复测量方差分析显示，DAO与D-乳酸均在组间（DAO：F=4.166，P=0.016；D-乳酸：F=5.294，P=0.004）和时点间（DAO：F=4.082，P=0.032；D-乳酸：F=6.022，P=0.003）差异有统计学意义，组间·时点间交互作用差异无统计学意义（均P＞0.05）。多重比较显示在发病后0.5 h，EHS组血浆DAO活性及D-乳酸浓度明显高于LUTI-EHS 组［（1 028.436±511.666） U/L vs. （714.171±129.778） U/L， （6.007±1.959） U/L vs. （4.831±0.839） U/L，均P<0.05］，同时SUTI-EHS组高于LUTI-EHS组［（944.160±862.023） U/L vs. （714.171±129.778） U/L，（5.724±1.562） U/L vs. （4.831±0.839） U/L］，差异有统计学意义（均P<0.05）；在发病后2 h EHS组血浆DAO活性及D-乳酸浓度明显高于LUTI-EHS 组［（827.217±460.838） U/L vs. （604.533±163.234） U/L，（5.401±1.315） U/L vs. （4.002±0.510） U/L］，差异有统计学意义（均P<0.05）。组织病理学显示，UTI治疗能显著减轻肠黏膜绒毛水肿、脱落及炎性细胞浸润，降低Chiu′s评分（F=108.648，P<0.05）。 结论 乌司他丁对劳力型热射病大鼠肠黏膜屏障功能具有一定保护作用，该效应呈剂量依赖性，尤其在发病初期保护作用更显著，能够改善预后、降低病死率。

Abstract

Objective To investigate the protective effects of different doses of ulinastatin （UTI） on the intestinal mucosal barrier in rats with exertional heat stroke （EHS）. Methods In this study， 134 male SD rats were selected and randomly divided into the following four groups： the blank control group （Normal-Control， n=8）， the EHS group （n=42）， the small-dose ulinastatin treatment group （SUTI-EHS， n=42）， and the large-dose ulinastatin treatment group （LUTI-EHS， n=42）. For the EHS group， the SUTI-EHS group， and the LUTI-EHS group， the EHS model was constructed by applying heat stress combined with exercise. Once the model was successfully established， 2 mL of 0.9% sodium chloride solution， 2×10⁴ U/kg UTI， and 5×10⁴ U/kg UTI were injected into each group of rats through the tail vein immediately. For each group， 10 rats from each group were randomly selected to observe the survival time and 8-hour mortality rate. The remaining rats were tested at four time points （30 min， 2 h， 4 h， and 6 h） after the onset of the disease to measure the plasma diamine oxidase （DAO） activity and D-lactic acid concentration. Meanwhile， pathological examination and injury scoring of the small intestinal tissue were performed. Results Compared with the EHS group， the survival time of rats in the SUTI-EHS and LUTI-EHS groups was significantly prolonged ［（3.705±1.849） h vs. （6.618±3.169） h， （3.705±1.849） h vs. （9.748±5.551） h， both P<0.05］， and the 8-hour mortality rate decreased significantly （100% vs. 50%， 100% vs. 30%， both P<0.05）. The plasma DAO activity and D-lactic acid concentration in the EHS group rapidly increased after the onset of the disease， reaching a peak at 0.5 h， and then gradually decreased； At each time point， they were higher than those of the control group. The DAO levels in the LUTI-EHS and SUTI-EHS groups were lower than those of the EHS group at the same time points. Repeated measures variance analysis showed that there were significant main effects of group （DAO： F=4.166， P=0.016； D-lactic acid： F=5.294， P=0.004） and time （DAO： F=4.082， P=0.032； D-lactic acid： F=6.022， P=0.003）， and the interaction effect of time × group was not significant （all P>0.05）. Multiple comparisons showed that at 0.5 h after the onset of the disease， the plasma DAO activity and D-lactic acid concentration in the EHS group were significantly higher than those in the LUTI-EHS group ［（1 028.436±511.666） U/L vs. （714.171±129.778） U/L， （6.007±1.959） U/L vs. （4.831±0.839） U/L， both P<0.05］， and higher in the SUTI-EHS group than in the LUTI-EHS group ［（944.160±862.023） U/L vs. （714.171±129.778） U/L， （5.724±1.562） U/L vs. （4.831±0.839） U/L， both P<0.05］， showing significant differences. At 2 h after the onset of the disease， the plasma DAO activity and D-lactic acid concentration in the EHS group were significantly higher than those in the LUTI-EHS group ［（827.217±460.838） U/L vs. （604.533±163.234） U/L， （5.401±1.315） U/L vs. （4.002±0.510） U/L］， showing significant differences （both P<0.05）. Histopathology showed that UTI treatment could significantly alleviate intestinal mucosal villus edema， shedding， and inflammatory cell infiltration， and reduce the Chiu's score （F=108.648， P<0.05）. Conclusion UTI has a certain protective effect on the intestinal mucosal barrier function in rats with EHS in a dose-dependent manner， and it is more significant in the early stage of onset， thereby improving the prognosis and reducing the mortality rate.

Graphical abstract

关键词

热射病 / 乌司他丁 / 二胺氧化酶 / D-乳酸

Key words

heat stroke / ulinastatin / diamine oxidase / D-lactic acid

劳力型热射病（exertional heat stroke，EHS）是热射病的一个特定类型，是机体在进行中高强度训练或体力活动时（尤其是在高温/高湿环境中），由于产热与散热失衡造成体内严重热蓄积，进而引发重要器官与组织发生严重的实质性损伤，最终形成一种以多器官功能障碍为特征的急性临床综合征^［1］。在临床观察中，该病症在健康青年群体中具有较高的发病率，其中尤以夏季参与训练的官兵以及从事体育运动的运动员更为多见^［2］。此病症的显著特征之一便是发病迅速，往往在短时间内就会出现明显的症状表现，导致多脏器功能损伤，病情进展快，病死率高。基于一项多中心研究的数据，热射病的总体病死率处于较高水平，高达32.4%，在这些热射病患者中，EHS患者所占的比例为26.4%，其病死率则为30%^［3］。尽管在临床治疗过程中，已积极采取降温手段以缓解患者的全身炎症反应，同时实施全面的脏器支持治疗措施，然而热射病的病死率依旧维持在较高水平。目前认为，在热射病的发病进程中，胃肠道属于首当其冲遭受损害的重要器官之一。于疾病发病的早期阶段，患者便会表现出胃肠道功能紊乱的相关症状^［4］，表现为恶心、呕吐、腹痛或腹泻等症状。越来越多的研究认为，EHS会大大加剧胃肠道功能紊乱，并且与劳力性热应激的程度成正比，导致肠黏膜通透性增加，伴有内毒素血症^［5］。乌司他丁（ulinastatin，UTI）是一种广谱蛋白酶抑制剂，具有抗炎、稳定溶酶体膜、保护内皮细胞等多重作用，有研究证实UTI在脓毒症、休克等危重症中显示对肠黏膜的保护潜力^［6］。本实验在此基础上，初步探讨UTI对EHS大鼠血浆肠黏膜屏肠损伤标志物及肠道形态学影响，旨在明确UTI对EHS大鼠肠黏膜屏障保护作用并探索量效关系，对推进相应的治疗措施、改善EHS患者的预后具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 实验动物

本实验选用成年雄性SD大鼠，其级别为无特定病原体级，周龄为8周，体重范围为225 ~285 g。大鼠均由中国人民解放军总医院医学实验动物中心负责提供，许可证编号0257114。为保证实验动物个体间互不干扰，本次实验的大鼠采用分笼饲养模式。在整个实验进程里，动物的饲养管理以及所有相关实验操作，均严格遵循实验动物伦理与福利的相关规定和要求，以此确保实验的科学性、合理性与伦理性。

本动物实验经解放军总医院伦理委员会审查批准（批准文号：309202011301010）。

1.2 实验试剂与设备

本实验所使用的各类物资来源明确、规格合规，具体如下：环境训练实验室、实验动物运动跑台（国家体育总局体育科学研究所）；乌司他丁注射液（广东天普生化医药公司生产，国药准字H19990134）；二胺氧化酶（diamine oxidase，DAO）酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）试剂盒以及D-乳酸ELISA试剂盒均采购自上海西唐生物科技有限公司；此外，还配备了Powlab28sp生理记录仪、直肠测温探头、定时秒表、生物组织包埋机、组织切片机以及光学显微镜、离心机、EP管、动物解剖实验台及解剖器材。

1.3 EHS动物模型制备

将134只大鼠均进行6 d适应性递增负荷跑台训练，首日速度为10 m/min跑步10 min，次日开始速度每天增加1 m/min，至第6天增至15 m/min，时间固定在30 min。将环境训练实验室的温度精准调控至（40.0±0.5）℃，湿度设定为70%±5%。与此同时，把具备5条跑道的实验动物运动跑台安置于该实验室内，待其预热至符合实验要求的温湿度条件后，对实验大鼠进行标记处理，随后，将大鼠逐一安置于动物跑台的各个独立跑道，启动并开展跑步运动。在此实验阶段，跑台坡度统一设定为0 °，速度恒定维持在15 m/min。实验进行期间，采用专业的体温监测设备，每隔5 min对大鼠的直肠温度进行精准测量，并详细记录大鼠出现发病症状的具体时间。上述监测与记录工作均严格依据实验性热射病诊断标准执行^［7］（参考动物热射病诊断标准），以确保实验数据的准确性与可靠性：当大鼠因遭受到高温应激刺激的情况下，其核心体温会升高到42.5 ℃，或者动脉收缩压先升到最高点，接着开始往下降的这个转折时刻，依据实验性热射病诊断标准，可判定该大鼠已发生中度热射病。在本实验研究过程中，将大鼠直肠温度首次达到42.5 ℃的时刻精确记录为发病时间，以此作为后续实验数据分析与评估的重要时间节点^［8-9］。

1.4 动物分组及处理

完成训练的大鼠随即被赋予随机编号，随后借助计算机软件开展分析工作，依据完全随机分组的原则，将所有大鼠划分为4个实验组：分别为空白对照组（Normal-Control组）8例、劳力型热射病组（EHS组）42例、小剂量乌司他丁治疗组（SUTI-EHS组）42例、大剂量乌司他丁治疗组（LUTI-EHS组）42例。空白对照组不做任何处理，置于温度（26±1）℃，湿度60%±5%的环境下1 h。EHS组在造模成功后立即给予2 mL 0.9%氯化钠尾静脉注入。于造模成功之时，SUTI-EHS组即刻通过尾静脉注入的方式给予剂量为2×10⁴ U/Kg UTI。与此同时，LUTI-EHS组在造模成功后也立即经尾静脉注入剂量为5×10⁴ U/Kg UTI。EHS大鼠在造模成功后，停止运动及热应激，给予相应处理后均置于温度（26±1）℃，湿度60%±5%的环境下。

1.5 观察指标及标本采集

观察并记录各组实验大鼠从造模开始到造模成功的一般形态、核心体温（肛温）变化情况。实验分为两部分，第一部分：EHS组和SUTI-EHS组、LUTI-EHS组建模后予以相应尾静脉注入药物处理，随后各取10只大鼠，持续观察并记录其存活时间。待观察周期结束后，依据记录数据计算大鼠在8 h时间节点内的病死率；第二部分：Normal-Control组静置1 h后，其余EHS组、SUTI-EHS组和LUTI-EHS组大鼠随机分为4组，分别在30 min、2 h、4 h、6 h这4个时间节点，采用浓度为10%的水合氯醛作为麻醉剂，按照300 mg/kg的给药剂量，对各组大鼠实施腹腔注射麻醉操作。待完成注射后，使用止血钳夹持大鼠尾部，观察大鼠反应。当大鼠对夹尾刺激无任何反应时，判定其已达到适宜麻醉深度，此时将大鼠以仰卧位妥善固定于手术台上，为后续实验操作做好准备。对实验大鼠实施左侧颈外静脉置管术，通过该置管通道采集血液样本5 mL并置于生化管内妥善保存。完成采血后，对实验动物进行系统解剖，开展肠道组织取材工作。选取回肠末端为参照点，在其近心端5 cm处，使用无菌器械剪取长度为10 cm的肠段。随后，采用生理盐水对该肠段进行缓慢灌注，为了能够彻底清除小肠内部所残留的内容物。而后切取一小段肠管组织样本，随即迅速将其转移至预先盛装足量甲醛固定液的普通小瓶内，而后样本将作为后续苏木精―伊红（hematoxylin and eosin staining，HE）染色分析的关键实验材料，以观察肠道组织的病理学变化。

1.6 肠黏膜通透性及肠黏膜形态的观察

空白对照组静置1 h后，以及随机分为4组的EHS组、SUTI-EHS组和LUTI-EHS组大鼠，在各时间点（30 min、2 h、4 h、6 h），取血5 mL经离心（1 500 r/min，15 min），取上层血清用ELISA检测血清中DAO、D-乳酸水平，严格按说明书要求操作。小肠组织蜡块常规制备成5 μm厚的组织切片，HE染色，于每张切片中随机选取3个光镜视野（放大倍数为×100），依据Chiu′s法^［10］所制定的损伤分级标准进行评估。在该分级体系中，评分与损伤严重程度呈正相关，即评分数值越高，意味着组织所遭受的损伤越严重。其评判标准如下，0分：表现为黏膜绒毛处于正常状态；1分：可见上皮下间隙增大，此现象通常出现在绒毛的尖端部位，且常伴有毛细血管淤血的情况；2分：上皮下间隙出现扩张，上皮层与固有层呈现中度分离状态；3分：绒毛两侧的上皮层大量与固有层分离，同时部分绒毛顶端出现损害；4分：绒毛受到损害且伴有固有层毛细血管暴露，同时能够观察到固有层的细胞成分有所增加；5分：固有层出现破损、不完整的情况，伴有出血和溃疡形成。

1.7 统计学方法

应用SPSS 17.0统计软件分析数据。正态分布的计量资料以（\overline{x}±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用Dunnett-t检验，多时间点计量资料的比较采用重复测量方差分析；计数资料以例数（%）表示，组间比较采用χ²检验；球形假设不满足时，采用 Greenhouse-Geisser 法进行校正。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结　　果

2.1 一般状态观察

在实验观察中，空白对照组的大鼠表现出正常的行为模式，其反应灵敏，当受到外界刺激时，能够迅速作出明显且有效的逃避行为。与之形成鲜明对比的是，经过造模处理后的EHS大鼠，精神状态极差，其口唇出现紫绀现象，呼吸变得深大且急促，腹部紧紧地贴附在跑道上，失去了自主活动的能力。在受到刺激时，这些大鼠没有表现出明显的逃避行为，与空白对照组大鼠的反应差异显著。

2.2 存活时间、病死率

3组大鼠存活只数逐渐增加（EHS组=0只，SUTI-EHS组=5只，LUTI-EHS组=7只），EHS组大鼠全部在8 h内死亡，平均存活时间仅为（3.705±1.849）h，UTI干预显著改善了预后，SUTI-EHS组与LUTI-EHS组的平均存活时间分别延长至（6.618±3.169）h与（9.748±5.551）h，8 h病死率分别降至50%与30%，与EHS组相比差异均有统计学意义（P<0.05）。大剂量组在存活时间、降低病死率方面表现出优于小剂量组的趋势。见表1。

2.3 各组大鼠血清DAO、D-乳酸浓度检测

2.3.1 血清DAO变化

EHS组大鼠造模后DAO水平显著升高，0.5 h达峰，随后逐渐下降，各时间点均高于对照组，LUTI-EHS组和SUTI-EHS 组DAO水平均低于同期EHS组，3组中组间（F=4.166，P=0.016）、时点间（F=4.082，P=0.032）差异均有统计学意义，组间·时点间交互作用差异无统计学意义（P=0.564）。见表2。

2.3.2 血清D-乳酸变化

EHS组大鼠造模后D乳酸水平显著升高，0.5 h达峰，随后逐渐下降，各时间点均高于对照组，LUTI-EHS组和SUTI-EHS 组D乳酸水平均低于同期EHS组，3组中D乳酸水平组间（F=5.294，P=0.004）、时点间（F=6.290，P=0.003）差异均有统计学意义，组间·时点间交互作用差异无统计学意义（P=0.616）。见表3。

2.4 小肠组织形态观察

Normal-Control组肠黏膜绒毛结构完整、排列整齐。EHS组大鼠小肠组织呈现典型损伤：具体表现为肠上皮绒毛顶端上皮出现大面积的脱落与坏死现象，绒毛间质显著增宽，同时伴有大量炎性细胞的浸润。与之形成鲜明对比的是，采用2种不同剂量UTI进行治疗的组别，其大鼠肠黏膜的损伤程度相较于EHS组明显减轻，表现为肠上皮绒毛顶端上皮脱落、坏死减少，上皮完整性得到较好维持，但仍可见炎性细胞浸润、血管扩张等，其中LUTI-EHS组的改善最为显著，提示UTI治疗对EHS造成的肠黏膜损伤有部分减轻作用。见图1。

2.5 肠黏膜损伤评分

通过定量分析评估肠黏膜损伤程度，结果显示，EHS组大鼠的肠黏膜损伤Chiu′s评分处于最高水平，与之相比，SUTI-EHS组和LUTI-EHS组的肠黏膜损伤评分均降低，提示采用UTI进行治疗能够在一定程度上改善EHS大鼠的肠黏膜组织损伤状况。见表4。

3 讨　　论

热射病的病理生理核心是热应激直接导致的细胞毒性、全身炎症反应综合征和多器官功能障碍综合征^［11］。越来越多研究^［12-13］证实胃肠道黏膜屏障功能受损在热射病的发病机制中具有重要作用，肠道被视为“发动机”和“放大器”^［14］。在热射病的发病进程中，机体遭受来自环境因素或劳力性活动所引发的热应激刺激，此刺激会激活机体的热休克反应以及体温调节机制，进而引发内脏血流的重新分布，与此同时体内核心温度持续升高，肠道作为对缺血缺氧较为敏感的器官，率先出现缺血缺氧的现象，导致肠道组织发生水肿现象，细胞间的连接结构被打开，屏障功能遭受损害，最终一系列病理生理改变致使肠道黏膜出现损伤^［15］，上皮细胞发生凋亡，肠道的渗漏情况加剧。随着肠黏膜屏障受损，肠腔内的细菌和毒素发生易位经门静脉循环入血，引发内毒素血症，诱导瀑布样炎症反应，出现全身炎症反应综合征和多器官功能障碍综合征，并对肠道产生二次打击^［16-17］。

在本研究中，为客观地评估肠黏膜屏障的通透性状况，最终选取了DAO以及D-乳酸这2个指标作为观察对象，同时对小肠组织进行病理学检查与Chiu′s损伤评分。DAO是一种具备高活性的细胞内酶，在机体处于正常生理状态时，血液中的DAO含量极低，然而，一旦肠黏膜上皮细胞遭受损伤，细胞内的DAO释放量会显著增加，这些释放出的DAO可通过肠细胞间隙、淋巴管以及血液循环等途径进入血浆，引起血浆中DAO活性的升高^［18］。值得注意的是，DAO在外周血中的活性表现出相对稳定的特征，这一特性为其作为生物标志物提供了重要基础。该指标不仅特异性强、灵敏度高，而且可以精准地反映肠屏障受损的严重程度^［19-20］。D-乳酸作为肠道细菌发酵过程中所生成的代谢产物，在机体正常的生理状态下，因肠黏膜生物屏障具备完整的结构与功能，可有效阻隔D-乳酸，使其无法透过该屏障进入血液循环系统。然而，一旦肠黏膜生物屏障遭受损伤，其通透性随之增大，此时D-乳酸便能够突破受损的肠黏膜，进入血液之中，进而导致血液中D-乳酸水平发生改变。所以血液中D-乳酸的水平变化可作为间接反映肠黏膜通透性改变的重要指标^［21-22］。本研究结果显示，在EHS大鼠发病之后，对其血清进行检测发现，DAO以及D-乳酸这2项指标均呈现出显著升高的态势，提示EHS大鼠肠黏膜屏障受损、通透性显著升高。另外，通过观察肠黏膜病理并进行损伤分级，发现EHS大鼠肠上皮绒毛有部分坏死脱落，绒毛间质增宽，炎性细胞浸润，以及固有层充血，可观察到固有层的细胞成分增加。上述结果从组织病理上和生物化学方面均证实了，EHS大鼠在发病早期存在肠黏膜屏障的损伤，该结果与目前国内外研究相一致^［23-24］。

对于热射病的防治，除“快速降温”这一首要措施外，将“维护肠黏膜屏障完整性”作为核心治疗策略，对于遏制肠源性内毒素血症与细菌移位的发生，具有重要临床意义。UTI属于广谱型胰蛋白酶抑制剂，在生物医学范畴内展现出多元且关键的生物学活性。它具有抑制蛋白酶活性、稳定溶酶体膜、清除氧自由基、抑制炎症介质的过度释放、改善微循环等多种生物学活性^［25-26］。UTI在脓毒症、休克等临床危重症的治疗进程中，展现出多方面的积极治疗效应，具体涵盖抑制炎症反应进程、减轻氧化应激损伤、优化局部微循环状态以及降低细胞凋亡发生率等^［27-28］。近年来大量研究聚焦于UTI对肠道黏膜的保护机制，从现有的研究数据和成果来看已经有确凿的证据可以证实UTI对多种疾病导致的肠黏膜损伤有着明显的保护作用。有研究^［29］显示UTI不仅能缓解脓毒症大鼠肠黏膜组织损伤，并上调肠道紧密连接蛋白（如闭合蛋白）的表达，从功能和结构2方面修复肠黏膜屏障。靳高超等^［30］的研究验证了UTI可降低血清DAO水平、减轻大鼠肠黏膜病理损伤。一项最新研究^［31］显示，UTI通过抑制脓毒症小鼠肠道组织中Toll样受体4（Toll-like receptor 4，TLR4）/髓样分化因子88（myeloid differentiation factor 88，MyD88）/核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）通路活化，阻断该通路介导的炎症级联反应，减轻肠道炎症、保护肠黏膜屏障结构与功能，进而改善小鼠预后。Gould等^［32］对近期EHS患者进行了系统评估，发现热不耐受个体表现出更高的肠道炎症标志物水平，为理解EHS后肠道功能改变提供了临床依据。Wang等^［33］研究发现，UTI通过激活核因子E2相关因子2（nuclear factor erythroid 2-related factor 2，Nrf2）通路提升谷胱甘肽过氧化物酶等抗氧化酶活性，降低丙二醛等氧化产物水平，减轻胰腺炎引发的肠道氧化应激，保护肠黏膜细胞结构完整，同时UTI可上调紧密连接蛋白（闭合蛋白、紧密连接蛋白1）表达，改善肠黏膜紧密连接结构，减少肠黏膜通透性标志物DAO、D-乳酸释放，降低肠道细菌移位风险，从而有效改善了急性胰腺炎大鼠的胃肠黏膜损伤情况。曹才文等^［34］研究显示，UTI可减轻非劳力型大鼠肠黏膜屏障损伤，降低了血浆DAO活性与D-乳酸浓度。本研究发现，不同UTI干预组DAO、D-乳酸总体水平整体升高后逐渐下降特征，在发病早期存在统计学差异，而组间·时点间交互效应差异无统计学意义提示UTI干预未改变DAO、D-乳酸的时间变化趋势，仅影响其幅度。因此发病初期LUTI-EHS组的降低更显著，有效缓解了肠黏膜通透性的增高，在发病初期UTI保护作用最显著，推测可能于UTI通过抗炎、抗氧化等机制发挥作用有关。与EHS组相比，UTI组小肠黏膜绒毛水肿、坏死脱落现象减轻，炎性细胞浸润减少，病理学Chiu′s评分较EHS组明显降低，缓解EHS所致的肠黏膜屏障功能的破坏，阻止了病情的进一步恶化^［35］。

综上所述，本研究主要观察了EHS大鼠肠黏膜屏障的损害，结果发现EHS破坏肠上皮绒毛，导致绒毛间质增宽、炎性细胞浸润等，进而导致肠黏膜通透性升高，且UTI对EHS大鼠受损的肠黏膜屏障展现出了一定的保护效应，尤其在发病初期。本研究的不足之处在于样本量小，且未直接检测全身或局部炎症因子水平，未能完整描绘从肠道损伤到全身炎症反应的实时动态变化。未来的研究将重点扩大样本量，监测细胞因子谱系变化，并可能结合中和抗体等工具，进一步明确特定炎症通路在本模型肠道损伤―多器官衰竭链条中的核心作用，从而更精准地验证乌司他丁等药物的干预靶点。

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