模拟肿瘤微环境条件体外诱导QBC939细胞上皮间质转化及间质上皮转化的研究

摘要

目的 通过共培养人胆管癌细胞QBC939与人肝内胆管上皮细胞HIBEpiC、猴脉络膜-视网膜内皮细胞RF/6A、人胚肺成纤维细胞MRC-5,体外诱导QBC939发生上皮间质转化(EMT)及间质上皮转化(MET)。方法 体外培养QBC939细胞，分为对照组C1(QBC939与QBC939共培养)、C2(单纯培养QBC939),与实验组E1(QBC939与HIBEpiC共培养)、E2(QBC939与RF/6A共培养)、E3(QBC939培养于MRC-5-CM)、E4(QBC939培养于HIBEpiC-CM)、E5(QBC939培养于RF/6A-CM)。采用平板克隆形成实验检测共培养后QBC939细胞增殖能力的变化，Transwell迁移及侵袭实验和细胞划痕实验检测共培养后QBC939细胞迁移和侵袭能力的变化，实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及蛋白免疫印迹(Western Blot)实验检测共培养后QBC939中E-cadherin、N-cadherin、Vimentin及MMPs的mRNA相对表达水平及相关蛋白表达情况。结果 在与HIBEpiC、RF/6A共培养120 d后，QBC939的增殖、迁移及侵袭能力明显降低，差异具有统计学意义(P<0.05);在HIBEpiC-CM、RF/6A-CM中培养120 d后，QBC939的增殖能力也明显降低，差异具有统计学意义(P<0.05),但迁移及侵袭能力较对照组无明显降低，差异不具有统计学意义(P>0.05);在MRC-5-CM中培养120 d后，QBC939的增殖、迁移及侵袭能力显著增高，差异具有统计学意义(P<0.05);qRT-PCR及Western Blot实验结果显示，在与HIBEpiC、RF/6A共培养120 d后，QBC939细胞中E-cadherin的表达明显上调，N-cadherin、Vimentin及MMP-3、MMP-7、MMP-9的表达明显下调，差异具有统计学意义(P<0.05),可以认为QBC939发生了MET;qRT-PCR实验结果显示，在MRC-5-CM中培养120 d后，QBC939细胞中E-cadherin的表达明显下调，N-cadherin、Vimentin及MMP-3、MMP-7、MMP-9的表达明显上调，差异具有统计学意义(P<0.05),QBC939可能发生了EMT。结论 人肝内胆管上皮细胞HIBEpiC及猴脉络膜-视网膜内皮细胞RF/6A能诱导QBC939细胞发生MET,人胚肺成纤维细胞MRC-5可能诱导了QBC939细胞发生EMT。

关键词

肿瘤微环境 / 肝门部胆管癌 / 上皮间质转化 / 间质上皮转化