KLK5影响宫颈癌细胞增殖、迁移能力及顺铂敏感性的体外研究

摘要

目的 通过细胞学实验揭示KLK5(kallikrein-related peptidase 5)基因对宫颈癌细胞增殖、迁移能力及其对宫颈癌细胞顺铂(Cisplatin, DDP)敏感性的影响。方法 建立稳定转染过表达KLK5的宫颈癌细胞系；Western blot实验验证KLK5在宫颈癌细胞ME180中的过表达效率，将细胞分为阴性对照组，以下称NC-KLK5(Negative control-kallikrein-related peptidase 5)及KLK5过表达组，以下称OE-KLK5(Overexpression-kallikrein-related peptidase 5);通过CCK-8实验分别检测两组细胞在培养0、24、36、48、60 h后的450 nm处的吸光度值(OD值),研究KLK5过表达对宫颈癌细胞迁移能力的影响，通过细胞划痕实验分别拍摄两组细胞在培养0 h、24 h、48 h的照片，测量划痕面积并计算出细胞迁移率，研究KLK5过表达对宫颈癌细胞迁移能力的影响；通过CCK-8实验测定0、2.5、5.0、10.0、20.0μM浓度的顺铂溶液处理24、48 h后NC-KLK5和OE-KLK5的活力，并计算出IC50值；同时，通过细胞划痕实验检测NC-KLK5细胞和OE-KLK5细胞在0μM和20μM浓度的顺铂溶液处理作用48 h后细胞迁移情况，测量划痕面积并计算出细胞迁移率，比较细胞的迁移能力，研究KLK5过表达对宫颈癌细胞顺铂敏感性的影响。结果 验证了OE-KLK5细胞中KLK5蛋白质的表达量显著高于NC-KLK5细胞，差异具有统计学意义(P<0.05)。CCK-8实验结果显示OE-KLK5组中的细胞增殖能力明显强于NC-KLK5组(P<0.01),且随着培养时间的增加，KLK5过表达组细胞的增殖能力相较于对照组NC-KLK5细胞差异逐渐增大。划痕实验结果显示培养48 h时，OE-KLK5细胞迁移率明显高于NC-KLK5细胞，有统计学意义(P<0.05)。CCK-8实验结果显示：不同浓度的顺铂处理下，作用时间为24 h时，两组细胞的活力在0、2.5、5.0μM浓度的顺铂溶液处理后均无明显差异，当顺铂浓度提高至10和20μM后，OE-KLK5组的细胞活力高于NC-KLK5组(P<0.05);相比之下，作用时间为48 h时，OE-KLK5组的细胞活力明显高于NC-KLK5组(P<0.01),差异更加明显，同时IC50值升高。细胞划痕实验结果显示：在作用48 h后，20μM浓度的顺铂作用下KLK5过表达宫颈癌细胞的迁移率明显高于对照组NC-KLK5细胞，差异具有统计学意义(P<0.001)。结论 KLK5基因过表达可以增强宫颈癌细胞增殖与迁移能力；KLK5基因过表达可以降低宫颈癌细胞顺铂敏感性。

关键词

KLK5 / 宫颈癌 / 顺铂