炭疽芽孢杆菌微滴式数字PCR定量检测方法的建立

摘要

目的 建立炭疽芽孢杆菌的微滴式数字聚合酶链式反应（Droplet digital PCR,ddPCR）方法 对炭疽芽孢杆菌实验室活动污染的定量评估提供技术支持。方法 以炭疽芽孢杆菌pXO1质粒编码保护性抗原pagA基因为靶序列，优化微滴数字PCR方法的反应条件，建立实验室微环境中炭疽芽孢杆菌核酸定量方法；对比微滴式数字PCR方法和平板计数法的定量评估效果，分析ddPCR的灵敏性、特异性和重复性。结果 建立的ddPCR方法最佳引物和探针终浓度分别为900 nmol·L^-1和250 nmol·L^-1,最佳退火温度为60℃,最佳升降温速度为1℃/s,本方法的最低检测下限为1.12 copies·μL^-1,未发现与常见疫病存在交叉反应，重复性试验的变异系数小于5%。结论 本研究中建立的炭疽芽孢杆菌的微滴数字PCR方法敏感性高、特异性强、重复性好，为疫情监测、流行病学调查和实验室污染微环境检测提供重要技术。

关键词

炭疽芽孢杆菌 / 微滴式数字PCR / 平板计数 / 定量评估 / 核酸检测

基金资助

“十三五”国家重大专项“艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”(2018ZX10734401-010)