PI3K/Akt信号通路通过上调HKDC1促进人肝癌HepG2细胞糖酵解、增殖及迁移

摘要

目的 探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通过调节含己糖激酶结构域的蛋白1(HKDC1)对人肝癌HepG2细胞糖酵解、增殖和迁移的影响及机制。方法 将体外培养的对数期人肝癌HepG2细胞，分为对照组、LY294002组和MK-2206组，RT-qPCR法检测各组细胞HKDC1 mRNA的表达水平，western blotting法分析各组细胞HKDC1蛋白的表达水平。将细胞分为si-NC组(转染si-NC)、si-HKDC1组(转染si-HKDC1),western blotting法分析各组细胞HKDC1蛋白的表达水平，CCK-8、5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)实验检测各组细胞增殖活力和划痕，Transwell实验检测各组细胞迁移率，细胞外酸化率(ECAR)实验检测分析各组细胞的糖酵解和糖酵解能力，葡萄糖及乳酸含量测定实验检测各组细胞内葡萄糖及乳酸含量。将细胞分为对照组、LY294002组、过表达HKDC1+LY294002组、MK-2206组、过表达HKDC1+MK-2206组，葡萄糖及乳酸含量测定实验检测各组细胞内葡萄糖及乳酸含量。结果 与对照组比较，LY294002组细胞HKDC1 mRNA表达明显降低(P<0.001),HKDC1蛋白表达降低(P<0.01);MK-2206组细胞HKDC1 mRNA表达降低(P<0.01),HKDC1蛋白表达明显降低(P<0.001)。与si-NC组相比，si-HKDC1组细胞HKDC1蛋白表达降低(P<0.001);与si-NC组相比，si-HKDC1组细胞增殖活力降低(P<0.05),EdU阳性细胞数明显减少(P<0.01);与si-NC组相比，si-HKDC1组细胞划痕愈合率明显降低(P<0.001),迁移细胞数明显减少(P<0.001);与si-NC组相比，si-HKDC1组细胞糖酵解和糖酵解能力明显减弱(P<0.01);与si-NC组相比，si-HKDC1组细胞内葡萄糖和乳酸含量明显降低(P<0.05)。与LY294002组相比，过表达HKDC1+LY294002组细胞内葡萄糖和乳酸含量明显升高(P<0.01);与MK-2206组相比，过表达HKDC1+MK-2206组细胞内葡萄糖和乳酸含量明显升高(P<0.001,P<0.01)。结论 PI3K/Akt信号通路通过HKDC1促进人肝癌HepG2细胞糖酵解、增殖和迁移。

关键词

磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B / 含己糖激酶结构域的蛋白1 / 有氧糖酵解 / 增殖 / 迁移