基于IgY特异性和Fe₃O₄-MNPs过氧化物酶活性的人载脂蛋白B100检测方法研究

摘要

目的 建立一种经济、便捷且特异性好的载脂蛋白B100（ApoB100）检测方法，为冠状动脉硬化及相关疾病的早期诊断提供技术支持。方法 使用ApoB100疫苗免疫高产蛋鸡，制备ApoB100鸡卵黄抗体（ApoB100-IgY）。基于磁纳米酶-3,3′,5,5′-四甲基联苯胺显色体系，将Fe₃O₄磁纳米颗粒（MNPs）和ApoB100-IgY特异性偶联，优化反应条件，建立ApoB100定量检测方法，分析该方法的灵敏度、特异度、重复性以及在模拟样品中的适用性。结果 制得的ApoB100-IgY纯度较高，抗体效价达到1∶512 000,特异性强。反应体系在优化后，确定MNPs-IgY探针的最佳用量为1.5 mg/mL,最佳吸附平衡时间为60 min,最佳孵育温度为37℃。该方法的检测范围为0.01～0.5 mg/mL,未发现与其他血浆蛋白的交叉反应，重复性实验的相对标准偏差（RSD）小于10%,模拟样品的加标回收率为94.8%～109.7%,RSD为7.0%～13.3%。结论 成功建立了一种操作简便、成本低廉且特异性好的ApoB100的检测方法，适用于大样本临床筛查和实验室检测。

关键词

载脂蛋白B100 / 鸡卵黄抗体 / 磁性纳米颗粒 / 冠心病 / 检测方法