lnc-Eif4a2/miR-142a-5p/Vmp1通路抵抗缺氧诱导小鼠海马神经元细胞损伤的机制研究

摘要

目的 研究长链非编码RNA真核翻译起始因子4A2(lnc-Eif4a2)、微小RNA 142a-5p(miR-142a-5p)以及液泡膜蛋白1(Vmp1)在缺氧诱导小鼠海马神经元细胞损伤中的作用及其调控关系。方法 建立缺氧诱导小鼠海马神经元细胞损伤模型，采用实时荧光定量PCR检测lnc-Eif4a2、miR-142a-5p以及Vmp1 mRNA表达。实验设为nc组(转染对照载体)、lnc-Eif4a2组(转染lnc-Eif4a2载体)、miR-142a-5p组(转染miR-142a-5p模拟物)以及Vmp1组(转染Vmp1载体)。采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率，CCK-8法检测各组细胞存活率，ELISA法检测各组促炎因子(TNF-α、IL-1β及IL-6)和抗炎因子IL-10表达，试剂盒检测各组丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)水平以及超氧化物歧化酶(SOD)活性。采用双荧光素酶报告基因试验和蛋白质印迹验证lnc-Eif4a2/miR-142a-5p/Vmp1通路。结果 与正常细胞相比，模型细胞中lnc-Eif4a2和Vmp1 mRNA表达降低，而miR-142a-5p表达升高。与nc组相比，lnc-Eif4a2和Vmp1组细胞凋亡率减少，细胞存活率增加，TNF-α、IL-1β、IL-6浓度降低，IL-10浓度升高，MDA和LDH水平降低，SOD活性升高。与nc组相比，miR-142a-5p组细胞凋亡率增加，细胞存活率减少，TNF-α、IL-1β、IL-6浓度升高，IL-10浓度降低，MDA和LDH水平升高，SOD活性降低。Vmp1是miR-142a-5p靶基因，lnc-Eif4a2海绵吸附miR-142a-5p上调Vmp1表达。结论 lnc-Eif4a2/miR-142a-5p/Vmp1通路具有对抗缺氧诱导小鼠海马神经元细胞损伤的作用，表明该通路可能作为缺血性卒中的潜在治疗靶点。

关键词

长链非编码RNA真核翻译起始因子4A2 / 微小RNA 142a-5p / 液泡膜蛋白1 / 缺氧诱导 / 海马神经元细胞损伤

基金资助

深圳市龙华区医疗卫生机构区级科研项目(No.2022112)