BPIFC基因真核表达载体的构建

摘要

目的 构建带有FLAG标签的BPIFC基因真核表达载体，建立稳定转染BPIFC基因的HaCaT细胞系。方法 设计引物通过PCR扩增出BPIFC基因片段，利用DNA重组技术将该基因片段定向插入pcDNA3.1-flag-N真核表达载体中，并对重组质粒进行双酶切及DNA测序鉴定。验证正确的重组质粒通过PI Max线性转染的方法转染至HaCaT细胞，通过G418筛选建立BPIFC稳定转染的HaCaT细胞系，并通过RT-PCR法和Western-blot法分别测定BPIFC mRNA和蛋白的表达量。结果 双酶切和DNA测序结果表明，pcDNA3.1-BPIFC真核表达质粒构建成功。RT-PCR结果表明，重组质粒的mRNA表达量高于空载转染组和空白对照组；Western-blot结果显示，BPIFC融合蛋白在HaCaT细胞中成功表达。结论 成功建立BPIFC稳定转染的HaCaT细胞系，可表达带有FLAG亲和标签的BPIFC蛋白用于后续实验研究。

关键词

BPIFC基因 / 真核表达载体 / HaCaT细胞 / 稳定转染