HYOU1调控ROCK2表达激活cAMP信号通路介导肝细胞癌转移的机制研究

摘要

目的 探讨缺氧上调蛋白1(HYOU1)与Rho相关卷曲螺旋激酶2(ROCK2)在肝细胞癌(HCC)中的表达特征、临床意义及其对HCC细胞恶性生物学行为的影响。方法 采用UALCAN数据库分析HYOU1和ROCK2在HCC组织及癌旁正常组织中的表达差异；采用GDC数据库绘制受试者工作特征(ROC)曲线，并进行Kaplan-Meier生存分析，评价HYOU1和ROCK2的诊断及预后价值。采用小干扰RNA和过表达质粒转染Huh7细胞，通过RT-qPCR和Western blot检测HYOU1和ROCK2表达变化；通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)和Transwell迁移实验评价细胞增殖和迁移能力；采用RNA免疫沉淀(RIP)实验检测HYOU1与ROCK2 mRNA的结合情况；采用Western blot检测cAMP信号通路相关蛋白表达。结果 数据库分析显示，HYOU1和ROCK2在HCC组织中均显著高表达，且高表达均与患者总体生存期缩短相关。ROC曲线分析显示，HYOU1和ROCK2对HCC均具有一定诊断效能。RT-qPCR和Western blot结果显示，Huh7细胞中HYOU1和ROCK2的mRNA及蛋白表达水平均显著高于正常肝细胞WRL68。敲低HYOU1可下调ROCK2表达，抑制Huh7细胞增殖和迁移；过表达HYOU1则产生相反作用。RIP实验显示，HYOU1免疫沉淀复合物中ROCK2 mRNA显著富集。进一步研究发现，过表达ROCK2可部分逆转敲低HYOU1对Huh7细胞增殖和迁移的抑制作用，而敲低ROCK2可部分削弱过表达HYOU1的促增殖和促迁移作用。Western blot结果显示，HYOU1表达变化可伴随p-CREB水平改变。结论 HYOU1和ROCK2在HCC中异常高表达，并与患者不良预后密切相关。HYOU1可能通过正向调控ROCK2表达并影响cAMP信号通路活性，促进HCC细胞增殖和迁移。

关键词

肝细胞癌 / 缺氧上调蛋白1 / Rho相关卷曲螺旋激酶2 / cAMP信号通路 / 增殖 / 迁移

基金资助

新疆维吾尔自治区自然科学基金(2025D01C166)