基于核壳纳米微球的三模式免疫层析法定量检测血清中的甲氨蝶呤

摘要

目的 以用药后人血液中的甲氨蝶呤为模板分析物，开发一种简便、快速、灵敏的3种信号模式输出的侧流免疫层析检测技术（LFIA）,用于测定甲氨蝶呤浓度，辅助临床治疗。方法 合成一种兼具比色、表面增强拉曼散射（SERS）及背景荧光猝灭免疫层析（bFQICA）三重功能的核壳纳米微球(R-Sphere^4-ATP)标记甲氨蝶呤抗体（MTX-mAb）制备免疫探针“R-Sphere^4-ATP-mAb^MTX”。将荧光供体分子罗丹明6G原位集成于硝酸纤维素膜，于层析条T线上划上甲氨蝶呤抗原，根据抗原抗体反应，R-Sphere^4-ATP-mAb^MTX会对T线产生荧光猝灭效应，不仅可以通过目视法观察T线颜色变化，也可通过干式荧光免疫分析仪和手持式拉曼光谱仪检测T线的荧光猝灭程度/SERS信号，从而根据剂量-信号变化关系进行目标物定量分析。结果 甲氨蝶呤的定量限为0.2 ng·mL^-1,在0.2～20 ng·mL^-1浓度范围内呈现良好的剂量-信号相关性（SERS-LFIA:r²=0.998 5;bFQICA-LFIA:r²=0.995 2）,回收率和重复性良好。并且应用于临床样本检测，SERS模式和bFQICA模式与临床方法的检测结果相关性良好，其相关系数分别是r=0.988（SERS-LFIA）,r=0.996（bFQICA-LFIA）,此外，该技术平台还成功拓展至多黏菌素B的定量检测，表明所建立的免疫层析法稳健、可靠。结论 本研究建立了一种简便、快速、灵敏的3种信号模式输出的侧流免疫层析检测技术并成功应用于临床药物检测，该技术平台可实现“从初步判断到精准定量”的全流程覆盖，更好地辅助临床快速血药浓度监测。

关键词

三信号模式 / SERS / 甲氨蝶呤 / 治疗药物监测 / 多黏菌素B

基金资助

新疆维吾尔自治区卫生健康委员会成果转化引导项目(2025001CGZHYDXM650025490); 新疆维吾尔自治区研究生实践创新项目(XJ2025G157); “天山英才”医药卫生高层次人才培养计划(TSYC202301A051); 天山英才项目(2023TSYCLJ0028)