骨髓间充质干细胞来源的外泌体miR-195-5p通过靶向FGF2对骨肉瘤细胞的抑制作用

金爱花; 苗玮; 朴美花

中国实验诊断学 ›› 2026, Vol. 30 ›› Issue (8) : 1170 -1179.

金爱花, 苗玮, 朴美花

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摘要

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSC)来源外泌体负载miR-195-5p对骨肉瘤细胞的抑制作用，并揭示其通过靶向FGF2抑制骨肉瘤细胞的作用机制。方法 143B骨肉瘤细胞分别过表达和抑制miR-195-5p,采用CCK-8、集落形成、划痕实验、Transwell及流式细胞术检测细胞增殖、克隆形成、迁移、侵袭及凋亡能力。采用Western blot检测FGF2、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达水平。为构建外泌体递送系统，体外贴壁法原代培养大鼠BMSC,将miR-195-5p模拟物转染至BMSC,并提取外泌体(BMSC-exo-miR-195-5p)。所获外泌体经透射电镜及表面标志蛋白鉴定后，与骨肉瘤细胞共孵育，利用共聚焦显微镜观察骨肉瘤细胞对外泌体的摄取情况。BMSC-exo-miR-195-5p处理骨肉瘤细胞后，检测其功能表型及FGF2/PI3K/AKT通路蛋白表达水平。结果过表达miR-195-5p显著抑制143B细胞的增殖、克隆形成、迁移侵袭能力，并诱导凋亡；而抑制miR-195-5p则表现出相反的生物学功能。过表达miR-195-5p可下调FGF2表达，并显著降低p-PI3K、p-AKT水平，但不影响总PI3K、AKT。成功提取BMSC来源外泌体，透射电镜显示为球形囊泡状结构，表达外泌体标志蛋白CD63、TSG101。共聚焦显微镜证实143B细胞可有效摄取DiI标记的外泌体，摄取后细胞内miR-195-5p水平升高、FGF2表达降低。BMSC-exo-miR-195-5p处理骨肉瘤细胞后，同样显著抑制骨肉瘤细胞增殖、克隆形成、迁移侵袭，并促进凋亡，且伴随FGF2下调及PI3K/AKT通路磷酸化抑制。结论 BMSC来源外泌体能有效负载并递送miR-195-5p至骨肉瘤细胞，通过靶向抑制FGF2进而阻断PI3K/AKT信号通路活化，从而抑制骨肉瘤细胞的恶性表型。本研究为构建基于BMSC外泌体的miR-195-5p递送系统，并在体外验证其对骨肉瘤细胞的抑制作用，提供了初步的实验依据。