鸡源JAK1蛋白单克隆抗体的制备及在禽流感病毒感染中的应用

摘要

为研究鸡源JAK1（Chicken JAK1,chJAK1）蛋白生物学功能，提取DF-1细胞总RNA为模板，RT-PCR扩增chJAK1 ORF全长并构建真核表达质粒pcDNA3.1-His-chJAK1，并以其中截短片段chJAK1-286～608 aa（ΔchJAK1）构建重组原核表达质粒pET-32a-ΔchJAK1，以E.coli表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备chJAK1蛋白单抗，并应用单抗初步分析了禽流感病毒感染DF-1细胞后chJAK1蛋白表达水平。结果表明：1)通过ELISA和Western blot筛选获得了2株单抗，分别命名为2E11和3F4，其单抗重链分别为lgG1和lgG2b亚类，轻链均为κ亚类，其腹水效价分别为6.4×10～4和1.6×10～4。2)间接免疫荧光和Western blot结果表明2株单抗都能识别鸡、鸭和鹅源JAK1，且2E11可与人源JAK1反应，但3F4不与人源JAK1反应。3)通过截短蛋白鉴定抗原表位，确定2E11识别的抗原表位为³⁶⁷HIVIKESTVSINKQDNKKMELKLSSHDEALSFASLI⁴⁰³,3F4识别的抗原表位为⁵⁸⁶RTQIYSGILNYKDDENEGYQNE⁶⁰⁸。4)禽流感病毒感染DF-1能诱导内源性chJAK1蛋白的下调表达。综上，本研究成功制备针对chJAK1的单抗，并证实chJAK1蛋白在AIV感染过程中发挥重要作用，单抗的制备为该蛋白的生物学及其抗病毒功能的研究奠定基础。

关键词

鸡源JAK1 / 蛋白表达 / 单克隆抗体 / 抗原表位 / 禽流感病毒

基金资助

国家自然科学基金项目（32373042）