鸡源JAK1蛋白单克隆抗体的制备及在禽流感病毒感染中的应用

霍臣智; 杨辉; 余玉霞; 董宇睿; 卞盈; 朱春成; 秦涛; 陈素娟; 彭大新; 刘秀梵

中国农业大学学报 ›› 2025, Vol. 30 ›› Issue (6) : 101 -111.

霍臣智, 杨辉, 余玉霞, 董宇睿, 卞盈, 朱春成, 秦涛, 陈素娟, 彭大新, 刘秀梵

作者信息 +

Author information +

文章历史 +

PDF

摘要

为研究鸡源JAK1（Chicken JAK1,chJAK1）蛋白生物学功能，提取DF-1细胞总RNA为模板，RT-PCR扩增chJAK1 ORF全长并构建真核表达质粒pcDNA3.1-His-chJAK1，并以其中截短片段chJAK1-286～608 aa（ΔchJAK1）构建重组原核表达质粒pET-32a-ΔchJAK1，以E.coli表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备chJAK1蛋白单抗，并应用单抗初步分析了禽流感病毒感染DF-1细胞后chJAK1蛋白表达水平。结果表明：1)通过ELISA和Western blot筛选获得了2株单抗，分别命名为2E11和3F4，其单抗重链分别为lgG1和lgG2b亚类，轻链均为κ亚类，其腹水效价分别为6.4×10～4和1.6×10～4。2)间接免疫荧光和Western blot结果表明2株单抗都能识别鸡、鸭和鹅源JAK1，且2E11可与人源JAK1反应，但3F4不与人源JAK1反应。3)通过截短蛋白鉴定抗原表位，确定2E11识别的抗原表位为³⁶⁷HIVIKESTVSINKQDNKKMELKLSSHDEALSFASLI⁴⁰³,3F4识别的抗原表位为⁵⁸⁶RTQIYSGILNYKDDENEGYQNE⁶⁰⁸。4)禽流感病毒感染DF-1能诱导内源性chJAK1蛋白的下调表达。综上，本研究成功制备针对chJAK1的单抗，并证实chJAK1蛋白在AIV感染过程中发挥重要作用，单抗的制备为该蛋白的生物学及其抗病毒功能的研究奠定基础。