稳定表达IRF2基因DF-1细胞株的建立及其对H9N2 AIV复制的影响

摘要

为构建一种稳定表达干扰素调节因子2(Interferon regulatory factor 2,IRF2)的DF-1细胞株，本研究首先针对IRF2成功构建重组慢病毒，再用重组慢病毒感染DF-1细胞，通过嘌呤霉素及有限稀释法筛选获得IRF2过表达多克隆细胞株。对构建的细胞株进行活力检测、Real-time qPCR以及Western blot等方法验证IRF2的体外表达效率，病毒增殖试验验证该细胞株对H9N2 AIV复制的影响，最后，通过双荧光素报告系统验证IRF2对干扰素刺激基因的调控作用。结果表明：1）细胞活性检测显示，稳定表达IRF2对细胞活性无显著影响（P>0.05）。2)Realtime qPCR以及Western blot证明IRF2的mRNA水平和蛋白水平在筛选的细胞株中表达相较于对照组细胞极显著增高（P<0.001）。3)Real-time qPCR(P<0.001)、Western blot(P<0.01)、TCID50(P<0.01)的体外试验证明，过表达DF-1-IRF2细胞株具有促进H9N2 AIV增殖的作用。4）双荧光素报告系统结果表明，IRF2能够极显著抑制ISRE(P<0.01)和NF-κB(P<0.01)活性，显著抑制IRF7(P<0.05)的活性。综上，本研究成功构建能够稳定表达IRF2基因的DF-1-IRF2细胞株，其能够增强H9N2 AIV的复制水平，为进一步研究IRF2在H9N2 AIV复制机制中的作用提供基础。

关键词

H9N2 AIV / 慢病毒载体 / DF-1细胞 / IRF2