自然感染绵羊肺腺瘤病毒羊肺组织线粒体自噬分子表达分析

摘要

为分析自然感染绵羊肺腺瘤病毒（Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV）羊肺组织中线粒体的质量及自噬相关蛋白表达的变化，本研究将自然感染JSRV羊的肺组织作为研究对象，利用病理组织学、PCR和免疫组化法对自然感染JSRV羊肺组织进行鉴定。利用透射电镜技术观察病羊肺组织中线粒体形态结构变化，分别采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹法（WB）检测感染组羊肺组织中线粒体相关因子线粒体外膜蛋白20(Outer membrane translocase 20,TOMM20)、线粒体内膜蛋白（Inner membrane translocase 23,TIMM23）、热休克蛋白60(Heat shock proteins 60,HSP60)的mRNA和蛋白水平的相对表达量，利用WB检测病羊肺组织线粒体蛋白中自噬相关因子Beclin1、LC3和选择性自噬受体p62蛋白水平的相对表达量。结果表明：1)PCR扩增的目的条带与JSRV env预期扩增片段大小一致。光镜下可见肺组织中肺泡Ⅱ型上皮细胞呈乳头状生长，且伸入肺泡中，同时免疫组化结果显示在增生的肺泡Ⅱ型细胞中检测到JSRV Env大量表达，而阴性对照组未检出。2）与健康对照组相比，透射电镜观察到感染组羊组线粒体大量损伤，并且出现双层膜结构的线粒体自噬体包裹损伤的线粒体，TOMM20、TIMM23和HSP60的mRNA相对表达水平和蛋白相对表达水平（P<0.01）均极显著下降。3）自噬因子Beclin1(P<0.05)和LC3(P<0.01)蛋白相对表达水平显著升高，p62相对表达显著下降（P<0.001）。综上，本研究发现自然感染JSRV羊肺组织中线粒体损伤严重并出现线粒体自噬现象，为JSRV的致病机制提供新的研究方向。

关键词

绵羊肺腺瘤病毒 / 绵羊肺组织 / 线粒体损伤 / 线粒体自噬

基金资助

国家自然科学基金项目（32072819、32360863）; 内蒙古科技重大专项（2021ZD0010）; 内蒙古草原英才创新团队项目（20151031）; 内蒙古教育厅创新团队项目（NMGIRT2412）; 牛羊疫病防控与发育工程创新团队资助项目（RZ2200001130）; 研究生科研创新资助项目（B202310722）