miR-27a-5p对肉牛子宫内膜上皮细胞容受性的影响

摘要

为探究牛子宫内膜容受性的形成在胚胎植入中是否起关键作用，本研究采集黄牛妊娠早期（第0天和第14天）的血液并利用P4和IFN-τ诱导bEECs构建bEECs容受性模型；利用RNA-seq、miR-27a-5p的过表达/干扰、qRT-PCR、CCK8和流式细胞术研究方法，探讨了miR-27a-5p在bEECs容受性中的调节作用及对容受性bEECs增殖和凋亡的影响。结果表明：1)miR-27a-5p在妊娠黄牛第14天血液及容受性bEECs中的表达量极显著降低（P<0.001），提示其可能与子宫内膜容受性和胚胎附植有关。2)RNA-seq分析结果表明过表达miR-27a-5p后容受性bEECs中31个基因显著上调和37个基因显著下调，这些差异表达基因主要富集在Wnt信号通路和mTOR信号通路上，与胚胎和子宫附植信号识别的调控有关。3)miR-27a-5p抑制试验结果表明，抑制miR-27a-5p促进了bEECs促容受性标志基因（VEGFA、LIF、IL-6、HOXA10、HOXA11）的表达水平，Wnt信号通路（β-catenin、WNT2B、WNT11和FOSL1）、mTOR信号通路（PIK3CB和PPP3R1）和凋亡（CASP9、CASP3和BAX）相关基因的mRNA表达量，极显著增加了细胞凋亡率（P<0.01）；同时抑制了抑容受性标志基因MMP9的mRNA表达量以及细胞增殖相关基因（CDK2、CDK4和PCNA）的mRNA表达量，极显著降低了细胞活力（P<0.001）。综上，下调表达的miR-27a-5p通过Wnt和mTOR信号通路减弱了对bEECs容受性及凋亡的抑制作用，促进了肉牛子宫内膜容受性。

关键词

肉牛 / miR-27a-5p / 子宫内膜上皮细胞 / 子宫内膜容受性