菊花倍性流式细胞术快速检测方法的优化

摘要

为建立大批量快速鉴定菊花倍性的流式细胞术，以二倍体菊花野菊和六倍体菊花‘秋艳’为材料，采用3种方法制备细胞核悬浮液，通过比较3种方法测定倍性的优劣，确定了研磨器研磨法为最优方法，并对研磨器研磨法中的裂解液、研磨器转速、裂解时间、过滤尼龙网目数、染色时间5个因素进行了探究。结果表明：1)3种样品制备方法均可准确判断倍性，刀片切碎法制备的样品流式细胞检测图峰型较好，耗费时间最长；研钵研磨法峰型中等，耗费时间适中；研磨器研磨法峰型中等，耗费时间最短。2）在研磨器研磨法中采用Otto裂解液、1 200～1 400 r/min研磨转速、裂解时间0 min、200～500目尼龙网、染色时间5 min处理样品速度较快，检测效果较好。综上，基于流式细胞仪的研磨器研磨法，其检测结果同研钵研磨法、刀片切碎法制备样品一样准确，还可实现批量快速鉴定菊花的染色体倍性，为菊花的倍性鉴定提供了快捷可靠的技术方法。

关键词

菊花 / 倍性检测 / 流式细胞仪 / 方法优化 / 快速鉴定