布鲁氏菌Bp26蛋白单克隆抗体制备及生物学鉴定

摘要

为制备布鲁氏菌Bp26蛋白单克隆抗体并对其进行生物学特性鉴定，本研究利用原核表达系统制备Bp26重组蛋白，以纯化的Bp26蛋白免疫Balb/c小鼠，通过杂交瘤技术制备针对布鲁氏菌Bp26蛋白的单克隆抗体，采用免疫印迹和间接免疫荧光试验鉴定其特异性，并通过ELISA测定亲和力常数及阻断活性，最后采用斑点杂交试验鉴定抗原识别表位。结果表明：1)成功表达布鲁氏菌Bp26蛋白，其相对分子质量在26 ku左右。2)获得2株Bp26单克隆抗体细胞株（6E8和4C4）。免疫印迹显示，2株Bp26单抗与重组Bp26蛋白和布鲁氏菌菌体Bp26蛋白均有较强的特异性反应；间接免疫荧光试验表明，Bp26单抗能够特异性识别感染巨噬细胞的羊种布鲁氏菌M5-90株，但不能识别感染巨噬细胞的M5-90△Bp26株。ELISA显示，单抗6E8和4C4的亲和力常数分别为2.58×10^-7和2.34×10^-7 mol/L，抗体阻断率均达到80%以上。斑点杂交结果显示，单抗6E8识别表位氨基酸序列为²³ASPDMAILNL³²，单抗4C4为⁷³GINIQPIYVYPD⁸⁴。综上，本研究成功制备了针对布鲁氏菌Bp26蛋白不同抗原表位的2种单克隆抗体，其具有较好的特异性、结合力及阻断活性，不仅为进一步探索布鲁氏菌Bp26蛋白的生物学特性奠定基础，而且为布鲁氏菌诊断技术的建立提供技术支持。

关键词

布鲁氏菌 / Bp26蛋白 / 单克隆抗体 / 表位鉴定