猪XCR1/FMDV双特异纳米抗体融合蛋白的制备与鉴定

杨利; 杜露平; 侯立婷; 张浩明; 于晓明; 李兰; 乔绪稳; 张元鹏; 秦竹; 王义伟; 郑其升; 陈瑾; 程海卫

中国农业大学学报 ›› 2025, Vol. 30 ›› Issue (1) : 131 -141.

杨利, 杜露平, 侯立婷, 张浩明, 于晓明, 李兰, 乔绪稳, 张元鹏, 秦竹, 王义伟, 郑其升, 陈瑾, 程海卫

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摘要

为通过将FMDV抗原靶向提呈至猪DC细胞进而提高疫苗免疫效力，本研究利用原核系统表达了猪XCR1目的蛋白，以该蛋白为免疫原免疫羊驼，提取其外周血淋巴细胞的总m RNA并反转录为c DNA，构建噬菌体展示纳米抗体文库，经过3轮亲和筛选获得猪XCR1特异性纳米抗体；利用SOE-PCR技术将该纳米抗体和猪O型FMDV特异性纳米抗体Nb205连接，构建XCR1/FMDV双特异纳米抗体融合蛋白。结果表明：1)成功原核表达猪XCR1目的蛋白，SDS-PAGE和Western blot结果显示，其相对分子量大小约35 ku，符合预期。2)羊驼血清效价为1∶64 000，满足建库要求；构建的噬菌体展示文库库容量约为1.91×10⁸CFU/m L，插入率为91.3%，多样性好；经3轮亲和筛选成功获得了纳米抗体Nb75，间接ELISA结果显示该纳米抗体能特异性与XCR1结合。3)利用SOE-PCR技术成功构建XCR1/FMDV双特异纳米抗体融合蛋白Nb75-205;SDS-PAGE和Western blot显示，该蛋白在大肠杆菌中可溶性表达，且呈现二聚体结构，间接ELISA结果显示Nb75-205能同时与XCR1目的蛋白和FMDV抗原结合。综上，本研究采用噬菌体展示技术成功获得猪XCR1特异性纳米抗体，并构建XCR1/FMDV双特异纳米抗体融合蛋白Nb75-205，且该蛋白为天然二聚体结构，与XCR1目的蛋白和FMDV抗原均具有较好的结合活性，为进一步开展FMDV抗原的猪XCR1靶向提呈研究奠定基础。