非洲马瘟病毒VP7蛋白ELISA阳性血清标准样品的初步制备

摘要

为制备非洲马瘟病毒VP7蛋白ELISA阳性血清标准样品，筛选一匹无常见马属动物疫病抗体的马作为靶动物，利用大肠杆菌原核表达系统制备的VP7蛋白为免疫原，将免疫原与MONTANIDE ISA35佐剂等体积混合乳化后，每两周免疫1次，共进行3次免疫，每周采集血清，检测其血清抗体ELISA效价。在血清效价高时大量采血分离血清，验证其无菌性，并将高效价血清进行冻干，参照《中华人民共和国兽药典》中的方法对该血清进行特异性检验、无菌检验、均一性评估和稳定性评估。结果表明：1）在免疫后第3周，可以检测到免疫马体内的非洲马瘟抗体。2）特异性结果显示马流感病毒、马疱疹病毒Ⅰ型、马疱疹病毒Ⅱ型、马疱疹病毒Ⅳ型、马动脉炎病毒、马传染性贫血病毒、马链球菌、马流产沙门菌、鼻疽伯克霍尔德氏菌、马驽巴贝斯虫和马泰勒虫抗体检测结果均为阴性。说明制备的标准血清背景干净，无常见马属动物疫病抗体。3）无菌检验结果显示酪胨琼脂培养基、胰酪大豆胨液体培养基和硫乙醇酸盐液体培养基上均无杂菌生长，说明制备的血清中无细菌和真菌等微生物污染。4）稳定性评估结果显示制备的血清在4、25和37℃环境下可稳定保存2个月，在-20和-80℃环境下可稳定保存6个月。综上，本研究成功制备了非洲马瘟病毒VP7蛋白ELISA阳性血清标准样品，该标准样品的制备为非洲马瘟的相关研究奠定理论基础。

关键词

非洲马瘟 / 阳性血清 / ELISA / 标准样品