脂质摄取在卵巢癌微环境中诱导CD4⁺调节性T细胞表达PD-1和CTLA-4的作用

摘要

目的：探究卵巢癌（ovarian cancer,OV）浸润性CD4⁺调节性T细胞（regulatory T cell,Treg）的脂质摄取与积累情况，及其与CD4⁺Treg中程序性细胞死亡蛋白1（programmed cell death protein 1,PD-1）和细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白-4（cytotoxic Tlymphocyte associated protein 4,CTLA-4）表达的相关性。方法：采用亲脂性荧光染料BODIPY™493/503和荧光脂肪酸探针BODIPY™500/510 C1 C12分别检测OV组织中的或与不同OV细胞系（ES-2、SKOV3、CAOV3）上清液共培养的人源CD4⁺Treg的细胞内脂质含量和脂质摄取能力；使用脂肪酸氧化抑制剂（Etomoxir）、脂肪酸合成抑制剂（C75）和脂肪酸摄取抑制剂磺基-N-琥珀酰亚胺油酸酯（sulfo-N-succinimidyl oleate,SSO）干预脂质代谢；通过流式细胞术分析CD4⁺Treg上免疫抑制分子PD-1和CTLA-4的表达。结果：OV组织CD4⁺Treg相比传统CD4⁺T细胞表现出更高的脂质含量和脂质摄取能力（P均<0.01）。在体外实验中，与基础培养基相比，OV细胞培养上清可显著提升CD4⁺Treg的胞内脂质含量与脂质摄取能力（P均<0.05），其中CAOV3来源的上清作用最为显著。此外，CAOV3上清液还能提升CD4⁺Treg中PD-1与CTLA-4的表达（P<0.05）。CD4⁺Treg的脂质积累随CAOV3上清浓度增加呈剂量依赖性上升（P<0.05），且其对胞外荧光脂肪酸类似物的摄取能力具有浓度依赖性（P<0.05）。脂肪酸摄取抑制剂SSO可有效逆转CAOV3上清液诱导的CD4⁺Treg脂质积累及PD-1、CTLA-4的高表达（P<0.05）；而脂肪酸氧化抑制剂Etomoxir与合成抑制剂C75则无显著影响。结论：OV微环境通过促进CD4⁺Treg的脂质摄取，提高细胞内脂质含量，促进其免疫抑制分子PD-1和CTLA-4表达。靶向脂肪酸摄取途径可能是逆转OV中Treg介导的免疫抑制的潜在策略。

关键词

卵巢癌 / CD4⁺Treg / 脂质 / PD-1 / CTLA-4